蛋白质化学修饰.pptVIP

蛋白质的化学修饰;主 要 内 容;一、化学修饰的原理;1.1 蛋白质功能基反应性的影响因素;1.1.2 氢键效应;1.1.3 静电效应;1.1.4 空间障碍(位阻效应);1.2 蛋白质功能基的超反应性;1.2 蛋白质功能基的超反应性;1.3 修饰剂反应性的决定因素;1.3 修饰剂反应性的决定因素;主 要 内 容;二、蛋白质侧链的修饰;2.1 特定的AA残基侧链基团的反应试剂 ;2.1.2 烷基化反应 ;2.1.3 氧化和还原反应;2.1.4 芳香环取代反应;另外，还有一些蛋白质与化学试剂的重要反应，如溴化氰(CNBr)裂解, 在自发和诱导重排的条件下主要导致Met残基的-COOH侧链肽键的断裂。;2.2 巯基的化学修饰;2.2 巯基的化学修饰;2.2 巯基的化学修饰;TNB2-;2.3 氨基的化学修饰;2.3.1 引入正电荷的修饰;2.3.2 电荷消失的修饰;2.3.3 引入负电荷的修饰;2.4 羧基的化学修饰;2.5 咪唑基的化学修饰;;;2.6 酚与脂肪族羟基的化学修饰;2.6 酚与脂肪族羟基的化学修饰;;2.6 酚与脂肪族羟基的化学修饰;2.7 胍基的化学修饰;2.7 胍基的化学修饰;2.7 胍基的化学修饰;2.8 吲哚基的化学修饰;2.8 吲哚基的化学修饰;研究发现,在较高浓度NBS时,酶活性降低开始是因Cys的氧化;2.8 吲哚基的化学修饰;2.9 硫醚基的化学修饰;;2.9 硫醚基的化学修饰;2.10 二硫键的化学修饰;;-S-S-因其在蛋白质序列分析中及在蛋白质折叠研究中的重要地位，故-S-S-的化学修饰、数目测定以及位置确定尤为重要。 蛋白质分子有无-S-S-，以及是链内还是链间-S-S-，可通过非还原/还原(NR/R)双向SDS电泳确定. 无-S-S-的蛋白质分子位于对角线上(两个方向电泳迁移率相等); 含链间-S-S-的, 因-S-S-被还原断裂, 第二向电泳时由于分子变小而处于对角线下方;含链内-S-S-的, 因-S-S-被还原断裂, 分子伸展而体积增大, 故处于对角线上方。;2.10 二硫键的化学修饰;Laemmli O K. Nature, 1970, 227: 680-685.;主 要 内 容;三、蛋白质肽链的交联;3.1 设计或选择交联剂要考虑的因素;3.1 设计或选择交联剂要考虑的因素;3.1 设计或选择交联剂要考虑的因素;3.1 设计或选择交联剂要考虑的因素;3.2 交联剂的类型;;3.2 交联剂的类型;3.2 交联剂的类型;3.2 交联剂的类型;3.2 交联剂的类型;3.3 交联剂的应用;3.3 交联剂的应用;主 要 内 容;四、 蛋白质的位点专一性修饰;4.1 亲和标记;4.1.1 Ks型不可逆抑制作用;4.1.1 Ks型不可逆抑制作用;4.1.2 Kcat型不可逆抑制作用;4.2 光亲和标记;4.2.1 光亲和标记原理;4.2.2 光亲和标记试剂的特点;4.2.3 光亲和标记的优越性;主 要 内 容;五、化学修饰结果的解释;5.1 修饰反应专一性的控制;5.1 修饰反应专一性的控制;5.1 修饰反应专一性的控制;5.1 修饰反应专一性的控制;5.1 修饰反应专一性的控制;五、化学修饰结果的解释;五、化学修饰结果的解释;5.3 修饰残基的不稳定性;5.4 未发现的修饰;主 要 内 容;六、蛋白质化学修饰的应用;6.2 在蛋白质序列分析中的应用;6.3 在研究蛋白质高级结构中的应用;6.4 确定蛋白质残基的功能;6.5 在蛋白质免疫化学研究中的应用;6.6 蛋白质化学修饰在生物工程中的应用;主 要 内 容;七、蛋白质化学修饰的局限性;七、蛋白质化学修饰的局限性