酵母菌细胞的显微镜计数.docVIP

广州大学学生实验报告 开课学院及实验室：生化楼328 2014年5 月15日 学院 化学化工学院 年级、专业、班 食品122 姓名 刘子瑞 学号 1205300075 实验课程名称 食品微生物实验 成绩 实验项目名称 酵母菌细胞的显微镜计数 指导老师 刘鹏 1.实验目的 （1）掌握显微镜的调整方法。 （2）了解血球计数板的构造和计数原理。 （3）掌握用血球计数板测定酵母菌细胞总数的方法。 2.血球计数板的使用原理? 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。? 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400?mm2。 ? 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 ? 1．16×25型的计数板??将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：? 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/?100?×400×10000×稀释倍数? 2．25×16型的计数板??中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：? 酵母细胞个数／1mL?＝80个小方格细胞总数/?80?×400×10000×稀释倍数 3.实验材料 材料：酵母菌菌悬液、显微镜、血球计数板、擦镜纸、滴管、95%酒精。 4.实验流程 检查计数板→稀释样品→加样→计算→清洗 5 实验步骤 5.1检查血细胞计数板 取血细胞计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否沾有杂质或干涸着的菌体，若有污物则通过擦洗、冲洗，使其清洁。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。 5.2稀释样品 将培养后的酵母培养液振摇均匀，然后作一定倍数的稀释。稀释度选择以小方格中分布的菌体清晰可数为宜。一般以每小格内含4或5个菌体的稀释度为宜。 5.3加样 取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用滴管取一滴菌稀释悬液注入盖玻片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可用吸水纸吸去。静置5～10min。 5.4镜检 待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找出计数室方格后，再用高倍镜测数。一般应取四角及中央5个中格的总菌数。计数时若遇到位于线上的菌体，一般只计数格上方（下方）及右方（左方）线上的菌体。每个样品重复3次。 5.5计算 取以上计数的平均值，按下列公式计算出每毫升菌液中的含菌量。 菌体细胞数（cfu/mL)=小格内平均菌体细胞数×400×104×稀释倍数 5.6清洗 计数板用毕后先用95%的酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则必须先浸泡在5%石炭酸溶液中进行消毒后再进行清洗。然后放回原位，切勿用硬物洗刷。 6.实验结果及结论 下列数据是每小格里酵母菌的数量。 编号 1 2 3 4 5 6 7 平均数 个数 7 7 4 14 10 8 9 8.4 高倍镜测数，取计数的平均值，每小格约为8个 菌体细胞数（cfu/mL)=8个×400×10000×1 7.注意事项 1从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。? 2如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计