人类辅助生殖技术的应用概述.pptVIP

男方45，XY，t(13;14)(p10;q10) 胚胎D 3 FISH结果与D 5/ D 6 array CGH结果对比 非整倍体筛查-SNP芯片 谢谢 谢谢你的阅读 知识就是财富 丰富你的人生 1、质量控制： 温度：23±3 ℃ 湿度：30 ～60% 气压： ≥10Pa 尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎实验室），十万级（更衣室，取精室） 可挥发有机物（VOC）： ＜ 0.5ppm 振动，光照及噪音： 胚胎培养实验室的质量控制和管理 2、管理： A、按功能和清洁度分区 B、实验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化妆品 C、培养箱和温台的监测 D、冰箱的监测 E、液氮罐的监测 胚胎培养环境的质量控制和管理 实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射 可用蒸馏水擦拭台面 可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染的台面或者区域 可使用吸尘器吸走灰尘 培养箱的清洁和消毒 实验室的清洁 1、温度和湿度：37.0±0.1℃，90% 2、pH：7.1 ≤ pHi ≤ 7.2， 7.2≤ pHe ≤7.4 3、气体：CO2和O2 4、渗透压：270 ～ 290mOsm/kg 胚胎培养系统 培养基的基本组成 水：99% 无机盐：维持培养基的渗透压和酸碱度 碳水化合物：提供胚胎发育的能量 氨基酸：促进胚胎体内外发育 维生素：调控细胞代谢 激素和生长因子：促进胚胎发育 大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素 抗氧化剂：减少氧自由基对胚胎的损伤 螯合剂：螯合重金属离子 抗生素：防止污染 胚胎培养系统 培养液配制和平衡 胚胎培养系统 单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%) 和N2(74%) 三气培养：CO2(5-6%)，O2(5%) 和N2(90%) 优势：更接近生理状态（2-8% O2） 单气培养和三气培养 1、精子的形态结构 精子和卵子 精子形态 精子变态示意图 2、卵子的形态结构 卵母细胞颗粒细胞复合体 GV 期 MI 期 MII 期 异常卵母细胞 1、常规体外授精 体外授精 精卵混合 精卵结合 2、卵胞质内单精子注射（ICSI） 人胚胎体外发育 异常受精 单原核 多原核 三原核 无原核 胚胎发育阶段：卵裂球的数目 胚胎形态学评分： 胚胎的碎片评分： 卵裂期评分标准 8-1-1 8-2-1 8-2-3 1期：囊胚腔小于胚胎体积的一半 2期：囊胚腔大于胚胎体积的一半 3期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等 囊胚的发育阶段 1期 2期 3期 4期 5期 6期 4期：扩张囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明带变薄 5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出 6期：完全孵化囊胚 胚胎移植数目： 35岁以下第一周期：2个 35岁以上或者第二周期以上：3个 单胚胎移植： 胚胎移植 胚胎移植管装载 胚胎移植管 空气 空气 胚胎 培养基 1、精子冷冻： 2、卵子冷冻： 3、胚胎冷冻： 4、生殖组织冷冻： 配子和胚胎的冷冻及复苏 程序化冷冻（慢速冷冻） 玻璃化冷冻（快速冷冻） 冷冻方法 Slow cooling - 0.3°C/min 慢速冷冻法 将胚胎放入含有一定浓度的冷冻保护剂处理后，慢速降温（0.2~3℃/min ）, 在这个过程中，随着细胞外温度的逐渐降低和细胞外冰晶的形成，细胞以一种平衡的方式逐步脱水。直到温度降至-150 ℃，至于液氮保存。 Vitrification - 50.000°C/min 1 sec. 玻璃化冷冻法 采用更高浓度的冷冻保护剂处理细胞，快速降温，使细胞内外的液体均达到玻璃化状态 玻璃化冷冻过程（两步平衡法） 在不同浓度的冷冻液中进行平衡 ES VS 2.装管 3. 投入液氮，在液氮罐中保存。 冷冻前 置入冷冻液后0min 置入冷冻液后4min 置入冷冻液后8min 囊胚冷冻前人工皱缩 皱缩前 皱缩后 控制性超排卵 B超监测下取卵 体外受精和胚胎培养 胚胎活检 对活检的细胞进行检测 选择胚胎移植入宫腔 植入前遗传学诊断(PGD) 常染色体隐性遗传病 β-thalassaemia Cystic fibrosis Spinal muscular atrophy Sickle cell disease 常染色体显性遗传病 Huntington’s disease Myotonic dystrophy Charcot-Marie-Tooth disease 性染色体遗传病 Fragile X syndrome DMD Haemophilia PGD适应证-单基因性疾病 PGD适应证-染色体病 相互易位 罗氏易位 非整倍体筛查 胚胎活检 卵裂期活检 囊胚期活检 人类辅助生殖技术应用概述 中山大学附属第一医院 徐艳文 人工授精 夫精人工授精 赠精人工授精 常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilizati