第十一章 补体结合试验.pptVIP

第一节 补体结合试验CFT 一.原理 根据任何抗原抗体复合物可激活、固着补体的特性，用一定量的补体和致敏红细胞来检查抗原抗体间有无特异性结合的一类试验 。 二. 技术要点 因该实验反应成分多，每一反应成分含量过多或过少都会导致错误结果，因此进行： 溶血素滴定（溶血素太少，假阳性） 补体滴定 （补体过多，假阴性。补体过少，假阳性。） 抗原滴定 （抗原太少，假阴性） 正式试验 第三节 补体组分检测 一.C3含量测定（单向琼脂扩散法） （也可用火箭电泳或免疫比浊法） 原理及方法同前 临床意义： 正常参考值 男：0.86~2.52g/L; 女：0.86~2.06g/L 含量降低见于：反复感染、急性肾小球肾炎、免疫复合物病、摸增生性肾小球肾炎 二. C4活性测定 1.原理： 去C4血清（氨水处理的豚鼠血清）+致敏绵羊红细胞 红细胞不溶解+含有C4的待检血清 红细胞溶解 溶血程度与待检血清中C4活性呈正相关。 2.技术要点： 制备无C4的抗原抗体补体复合物（EAR4) 将待检血清稀释一系列倍数，加EAR4，孵育，观察溶血程度（方法同CH50测定） * 第十一章 补体结合试验和 补体测定技术 永州职业技术学院 杨晓斌 补体结合的经典途径激活物： 抗原-抗体复合物 即：特异性抗体（IgG或IgM）与抗原 结合形成的免疫复合物 CFT包括：试验系统和指示系统；有五种成分参与。 RBC 溶血素 待检系统 Ag Ab C 指示系统 溶血反应 不溶血 Ag 无Ab C RBC 溶血素 溶血 阳性 阴性 结果 三. 方法评价 1.优点：敏感度高，特异性强。反应结果易观察，不同物理性状的抗原均适用。不需特殊设备，宜推广。 2. 缺点：操作复杂麻烦，补体易失活，待检血清或抗原中可能有抗补体成分。 该实验优点多，缺点也突出。目前临床很少用。 第二节 补体活性的测定及临床意义 血清总补体溶血活性（CH50）测定 1.原理: 绵羊红细胞（SRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血（CH50）为判定终点。 由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此实验反映了总补体的活性。 SRBC+溶血素 致敏SRBC+不同稀释度的待检血清（补体） 37C030分 以发生50%溶血的实验管为终点管，则该管血清中含有一个补体单位。 补体总量计算： 1 CH50（u/ml）= ×稀释倍数 引起50%溶血管 血清量（ml） 为什么要以50% 溶血作为判断终点？ 因为溶血程度和总补体活性间为S型曲线关系，在50%溶血的附近（30%—70%），曲线最陡。补体量稍有变化，溶血程度会发生很大影响，即在30%——70%溶血范围内能敏感反映补体含 量变化。因此，通常 以50%溶血作为判断 终点，而不用100% 溶血，因其相对不敏 感。 2.技术要点： （1）溶血素滴定： （2）正式试验 （3）50%标准管的配制 5%SRBC1ml 离心弃上清 + 蒸馏水0.5ml 红细胞全溶 + 0.5ml1.8%NaCl混匀呈等渗 + 1ml5%SRBC混合 + 巴比妥缓冲液0.5ml混匀，即50%溶血标准比色管。 （4）结果观察： 肉眼观察和用分光光度计（λ542nm)测出与50%溶血标准管最近的一管，求出总补体溶血活性。