蛋白质和多肽的氨基酸序列 分析.pptVIP

第十章蛋白质和多肽的氨基酸序列分析 引言 氨基酸是一种小分子的两性化合物，分子量在75～200Da之间，其化学通式为： 在生物体内出现的氨基酸都是L型，仅在少数微生物来源的多肽中出现D型氨基酸。 蛋白质和多肽是由20种氨基酸按照一定的顺序通过肽键连接成一长链，然后通过链内、链间的离子键、疏水作用等多种作用力进行折叠卷曲形成一定的构象并发挥其独特作用。氨基酸的排列顺序即蛋白质的一级结构决定了蛋白质的高级结构及功能。 因此，分析蛋白质的氨基酸序列是进行蛋白质结构功能研究中不可缺少的部分。 蛋白质测序的研究历史 引言 一级结构测定的基本流程 1. 拆分蛋白质分子的多肽链; 2. 鉴定多肽链的N-末端和C-末端残基; 3. 用两种或几种不同的断裂方法将多肽链裂解成较小的片段; 4. 对各肽段的氨基酸序列进行测序; 5. 重建完整多肽链的一级结构; 6. 确定半胱氨酸残基间形成的二硫键的位置； 7. 酰胺基位置的确定。 测定蛋白质的一级结构前的准备工作 1. 样品纯度必须97%以上； 聚丙烯酰胺凝胶电泳要求一条带 2. 测定蛋白质的相对分子质量； SDS，凝胶过滤法，沉降系数法 3. 测定蛋白质多肽链种类和数目； 种类： SDS数目：N末端氨基酸残基摩尔数/蛋白质摩尔数 4. 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数； 章节 第一节