酶的结构与 功能.pptVIP

　对修饰剂的要求：修饰剂具有较大的相对分子质量，良好的生物相容性；分子表面有较多地反应活性基团及修饰后酶活的半衰期较长。 （3）大分子结合修饰 常用的化学修饰剂 A、糖及糖的衍生物　主要有右旋糖酐、右旋糖酐硫酸酯、糖肽、葡聚糖等； B、高分子聚物　聚乙二醇（PEG）、聚乙烯醇 （PVA）、聚N －乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚丙烯酸（PAA）等； C、生物大分子　常用的有肝素、血浆蛋白、聚氨基酸类等；蛋白质或其他大分子物质等 大分子多聚物与具有生物活性的大分子物质通过共价键将大分子连接到酶分子表面，使之在酶的表面形成覆盖层，从而使酶的性质产生改变。 大分子在使用前要进行活化，方法有：溴化氢法、高碘酸氧化法、叠氮法、三氯均三嗪法等 白蛋白 NH2 + 酶 NH2 COOH COOH RN=C=NR’ 白蛋白 C—NH— 白蛋白 O 白蛋白 C—NH— 酶 O O 白蛋白与酶之间以羰二亚胺作为交联剂的修饰反应 （修饰酶） C—NH— 酶 酶 分子量在500-20 000 聚乙二醇类修饰剂应用最广，其生物相容性通过FDA认证。其分子末端有两个能被活化的羟基。分子修饰时多采用单甲氧基聚乙二醇（MPEG） MPEG—均三嗪衍生物 MPEG—琥珀酰亚胺类衍生物 MPEG—氨基酸类衍生物 肝素——含硫酸酯的粘多糖及适用于用来修饰溶解血栓酶类，增加酶的疗效。 酶经修饰后会产生各种各样的变化，概括起来有： (1) 热稳定性提高 ①修饰剂共价连接于酶分子使其天然构象产生一定的“刚性”，并形成分子内部基团的热振动，增加稳定性； ②修饰剂本身增加了酶分子表面的亲水性。 (2) 抗各类失活因子的能力提高 ①修饰剂所产生的空间屏蔽有效的阻挡了各类失活因子； ②酶分子中对蛋白质水解酶失活因子敏感基团被修饰。 (3) 抗原性消除； (4) 体内半衰期延长； (5) 最适pH改变； (6) 酶学性质变化； (7) 对组织分布能力改变 2、修饰酶的特性 3、化学修饰的局限性 (1)某种修饰剂对某一氨基酸的化学修饰专一性是相对的。 (2)化学修饰后酶的构象或多或少都有一些改变，因此这种构象变化将妨碍对修饰结果的解释。 (3)只能在具有极性的氨基酸残基侧链上进行，对于维持酶的空间构象的其它氨基酸侧链，目前还不能用化学修饰方法研究这些氨基酸残基酶的结构与功能中的作用。 (4)酶的化学修饰所提供的信息还得用X射线和其他方法来确定。 4、酶化学修饰的应用 解除医用酶 免疫原性 和抗原性 医药 理论研究 生物技术领域 提高医 用酶稳 定性 延长医 用酶体 内半衰期 氨基酸 残基的存 在状态 氨基酸 测序 确定酶 活性部 位 氨基酸 数量测 定 改变酶 最适pH 改变酶 底物专一性 有机溶剂 可溶解酶 提高酶耐热酸碱 有机溶剂能力 1、固定化酶的特点: ①对温度机械强度的稳定性高；②可以反复使用 ③更适合多酶体系 2、酶的固定化方法: （1）载体结合法:将酶结合于水不溶性载体的一种固定化方法。根据结合的方式不同，又可分为物理吸附、离子结合和共价结合三种。 *物理吸附：借助非共价键把酶吸附到载体上，如活性碳。 *离子结合：通过离子键结合于具有离子交换基团的水不溶性载体的固定化方法。载体为阴阳离子交换剂、树脂等。 特点：易制备利用效率高，但酶易流失。 *共价结合法：通过共价键把与酶活性无关的氨基酸功能基团连接在不溶于水的载体上。 特点：结合牢固，但得率低。 (二)固定化酶 (immobilized enzyme) E E E E E （2） 包埋法 网格型：将酶包埋于高分子化合物形成的网格中 微囊型：将酶包埋在半透膜中 缺点：孔径大小影响底物或 产物进出 （3）交联法 通过双功能试剂或多功能试剂（如戊二醛等）将酶蛋白与酶蛋白中的氨基酸残基作用，使酶与酶之间交联成网，凝集成固定化酶. 常用的是戊二醛彼此交联 E E E E E E E E E E E E E E E 固定化酶法生产高果糖浆 也称果葡糖浆或异构糖浆，它是以酶法糖化淀粉所得的糖化液，经葡萄糖异构酶的异构作用，将其中一部分葡萄糖异构成果糖，由葡萄糖和果糖而组成的一种混合糖糖浆。 淀粉 → 液化、糖化 → 葡萄糖浆 → 膜过滤 → 浓缩 → 异构化 → 部分变成果糖（42%）→混合 →浓缩、精制→ 55%高果糖浆 参与的酶：α-淀粉酶、淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖异构酶 高果糖浆的生产流程 固定化葡萄糖异构酶 葡萄糖