基因工程的工具课件.pptVIP

限制性内切酶作用过程 检测 鉴定： ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交 抗原抗体杂交 四、目的基因的检测与鉴定 1）以下说法正确的是 A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来 C 随堂练习 2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 随堂练习 3）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 运载体和目的基因用同一种限制酶处理 A 随堂练习 4）有关基因工程的叙述正确的是 A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 随堂练习 5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 随堂练习 1. 有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 随堂练习 BD 2.下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ D 3.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用 A.同种限制酶 B. 两种限制酶 C.同种连接酶 D. 两种连接酶 随堂练习 A 4.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 细胞的基因结构 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 与RNA聚合酶结合位点 真核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 能够编码蛋白质的序列 不能够编码蛋白质的序列 内含子： 外显子： 2.基因文库的构建方法 ①鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 （直接分离法） （一）从基因文库中获得目的基因 ②反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 核酸酶H 2.基因文库的构建方法 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) （一）从基因文库中获得目的基因 （二）利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制_____________的核酸合成技术 ③条件：____________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________等 ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 （二）利用PCR技术扩增目的基因 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）： 目的基因DNA受热变性，解链 b、复性（55℃-65℃）： 引物与单链互补结合 c、延伸（70℃-75℃）： 合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸 （二）利用PCR技术扩增目的基因 三、根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列