汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究.docVIP

汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究 ???? 汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型的研究 ???? 中国病毒学 1999年第4期第14卷 研究报告 ???? 作者：唐家琪　操　敏　王长军　雷万里　魏春宝　叶春燕 ???? 单位：南京军区军事医学研究所，南京 210002 ???? 关键词：肾综合征出血热病毒；基因分型；重组抗原；逆转录-聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP) ???? 　　摘　要　根据HFRSV汉滩型(HTN)代表株76-118和汉城型(SEO)代表株R22基因资料，设计了两组引物，用电脑软件分析证明设计符合引物标准。以一组引物克隆全长S基因片段和N端的部分S基因片段，并使它们在T7系统进行融合表达和非融合表达。非融合表达产量虽不及融合表达高，但生物活性好。以非融合表达的两个S基因片段产物作间接ELISA的包被抗原，其工作浓度均达1∶10 000。用另一组引物建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)，检测我国不同地区由8种主要宿主分离的37个HFRSV毒株，2个阳性标准对照毒株和5个阴性对照标本，并与cELISA法比较，二者阳性检出率分别为100%和84.6%，符合率为84.6%，但前者比后者敏感性高15.4%。对其中20个毒株的PCR扩增产物先后用RsaⅠ和HindⅢ作二级酶切，建立了逆转录-聚合酶链式反应