生化仪器分析Dynamiclightscattering.PDFVIP

生化儀器分析: Dynamic light scattering 另稱 : Quasielastic light scattering spectroscopy (QELSS), photon correlation spectroscopy (PCS), or (dynamic) light scattering (DLS) 目的 :利用生化分子在溶液中對光折散( 射的物理性質，來測定生化分子的物理性質。) 實驗方法特點 : (1) 非破壞性測量 (2)實驗的樣品包括 macromolecules, protein, polysaccharides, synthetic polymers, colloidal particles and aggregates, micells and microemulsions. (3) estimate size (molecular weight) of macromolecules in solution (mono-disperse case) (4)實驗時間 :5-30 mins ，particle size: 5nm-50µm (3) Estimate the width of molecular weight distributions. (poly-disperse case) (4)測量 translational diffusion coefficient of macromolecules in solution. 樣品體積可以小到 12 mL ， 而樣品可以回收或是連續 式測量。 DLS的原理 DLS的全名為 dynamic light scattering ，由於所測定分子在溶液中不是固定不變的，所 以測量的結果是所有分子在溶液中的集體平均效果，因此稱之為dynamic 。而分子在 溶液中的特性是以光照的方式，不同形狀及大小的分子對入射光都會有不同的折射 或( diffraction)效果來評估，因此稱之為dynamic light scattering(簡稱之 DLS) 。 左圖為儀器裝置的示意圖，入射光源與偵檢 器呈非直線性位置。入射光照至樣品後當由 樣品槽內分子散射的光，部份會由偵檢器接 收。如果在樣品和偵檢器之間放置一片不透 明白板，樣品散射 pattern會在白板上呈現黑 及白亮( 影，而且隨時間閃爍變換。) 使用photodetector(偵檢器可以測定) I(t)變 動值 (左圖) 。在白板上的flickering effect來 自溶液中 solute macromolecule到達thermal equilibrium後，自身的Brownian motion所 造成.(因此 DLS所測定樣品的是沒有濃度 gradient的平衡溶液 ) 。I(t)隨著時間在 I(平 均值)上下隨機變動。