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实时荧光定量PCR 的原理和应用 2010.10 雅睿生物黄宝福 目录 • 实时荧光定量PCR原理 PCR 荧光标记 绝对定量和相对定量 • 实时荧光定量PCR应用 • 实时荧光定量PCR发展 digital PCR,qPCR Array 实时荧光定量PCR原理 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR) 1971年，Khorana提出：经过DNA变性， 与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引 物，并不断重复该过程便可克隆tRNA 基因。 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR) 1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚 合酶链反应 （PCR） 基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制 最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐 热，使这一过程耗时，费力，且易出错 耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随 后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪 1989年美国 《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发 明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔 化学奖。 PCR DNA 5’ 3’ 解旋解链 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 结合引物 TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 子链延长 3’ 5’ PCR 5’ 3’ DNA ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 解旋解链 DNA GGAUCG 3’ 聚合酶 5‘ 结合引物 5‘ DNA 3’ AUCGCG 聚合酶 子链延长 TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ PCR 5’ 3’ DNA ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 解旋解链 DNA GGAUCG TAGCGCTATCGCATCGACGCT 3’聚合酶 5‘ 结合引物 5‘ DNA 3’ AUCGCGATAGCGTAG