工业微生物菌种改良与重组工程技术.pdf

924 2006, Vol. 27, No. 12 食品科学 ※专题论述 工业微生物菌种改良与重组工程技术 付桂明，许 杨* ，李燕萍 (南昌大学 食品科学教育部重点实验室，南昌大学中德联合研究院，江西 南昌 330047) 摘 要：工业微生物菌种改良技术经历了诱变、遗传重组和基因工程技术改良菌种等三个发展阶段，第二代基因 工程技术——基因打靶技术具有定位性强、打靶后新基因随染色体DNA 稳定遗传的特点，使人们可以有目的地去 改造生物的遗传物质，创造有利于生产的微生物新品种。重组工程技术是在大肠杆菌体内利用一个独立噬菌体重组 系统，使用40～60bp 的同源序列，高效催化线性打靶DNA 片段与染色体DNA 或质粒载体上的靶基因发生同源重 组，对靶基因进行精确修饰。利用重组工程技术构建的打靶载体的同源序列长度可达10kb 以上，甚至100kb 以上， 大大提高了同源重组的效率。重组工程技术具有完全取代传统DNA 重组技术的趋势，为微生物的基因打靶技术提 供了一个全新、高效手段，广泛应用在微生物菌种改良的基础理论研究和实际应用领域。 关键词：菌种改良；重组工程技术；基因打靶 IndustrialMicrobeStrainImprovementandPhageRecombineeringTechnique FU Gui-ming，XU Yang*，LI Yan-ping (Key Laboratory of Food Science, Ministry of Education, Sino-Germany Joint Research Institute, Nanchang University, Nanchang 330047, China) Abstract：The techniqueof improvingindustrialmicrobe strainexperiencedthreedevelopment stages:mutagenesis, genetic recombinantandgeneticengineering.Asthelatestgeneticengineeringtechnique,genetargetingtechniquehasthecharacteristics ofprecisepositioningandstableheredityofnewgene.Withgenetargetingtechnique,peoplecanhavedestinationtoreformthe hereditarymaterial ofmicroorganism, andcreatethenew speciesmicroorganism infavoroftheproduction.Recombineering is the technique which promotes homologous recombination between the targeting DNA using an independent phage recombina- tion system with a 40～60bp homologous sequence, and accurately modifies the target gene in chromosome DNA or the vectors inE.coli.Byusingoftherecombineeringtechnique,thelengthofhomologous sequenceofgenetargetingvectorcanreach 10kb, evenexceed100kb,hencetheefficiencyofhomologousrecombinationcanincreasehundredstimes.Thetechniqueofrecombineering has trendtoreplace the traditio