质粒DNA的提取和鉴定_生物化学与分子生物学.pptVIP

水平电泳系统 室温下静置1小时左右，凝胶固化。将带凝胶的胶床置于电泳槽中，并使样品孔位于电场负极； 向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液，越过凝胶表面即可； 轻轻拔出固定在凝胶中的梳子； 样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀； 上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中，加样量为10 μl ； 盖上电泳槽，接通电源，开始电泳； 电泳条件：电压80v；时间20～25分钟； 电泳结束后，切断电源，取出凝胶。 电泳结果分析： ① 紫外检测仪直接观察电泳条带 ② 摄影记录 预期实验结果 2.4 kb 6.1 kb 2 kb Marker 6 Kb 注意事项 电泳前，确认样品孔位于电场负极； 因EB存在，全部操作过程要带防护手套； 凝胶浓度选择根据样品DNA分子大小而定，所以电泳前应对DNA片段大小有粗略的估计。 琼脂糖凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围 胶浓度（％） 线性DNA分子大小（kb） 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.4～6 1.5 0.2～4 2.0 0.1～3 质粒的测序鉴定 为了检查插入载体的外源片段是否与原来基因的序列一致，或发生突变的是否改变编码区的读框，是否发生两种性质差别较大的氨基酸替代，最好的方法是测序。 现在有很多生物公