SDS_PAGE_原理_步骤_详细的介绍_含图片.pptVIP

（5）偏斜现象 电极放置不平行引起或加样位置偏斜而引起 （6）带太宽 加样量太多或加样孔泄漏引起 知识回顾Knowledge Review 2、操作（1） 制备分离胶（2） 制备积层胶(堆积胶） 分离胶聚合之后 （3） 加样品样品的处理 在蛋白溶液中加入过量的SDS后，可引起以下的反应： 蛋白质本身的电荷被屏蔽 氢键断裂 疏水相互作用被取消 多肽被去折叠(二级结构破坏),并形成椭球型 ①还原SDS处理 当加入还原试剂DTT或β-二巯基乙醇后，蛋白质被完全去折叠，只根据分子量分离 ②带有烷基化作用的还原SDS处理 烷基化作用可以很好地并经久牢固地保护SH基团，而得到窄的电泳带  ③非还原的SDS处理 许多样品，如生理体液、血清或尿素，一般只需用1%SDS在100℃煮沸3分钟，并不需要加还原剂，此时二硫键不能被断裂，蛋白并没有完全被去折叠  （4） 电泳 （5） 固定 （6） 染色考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue）①R-250  三苯基甲烷，红蓝色，每个分子含有两个SO3H基团，偏酸性，和氨基黑一样也是结合在蛋白质的碱性基团上  ②G-250 二甲花青亮蓝，蓝绿色。 银染色 银染的机制是将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上