马铃薯腐烂茎线虫l型半胱氨酸蛋白酶新基因(dd-cpl-1.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, January 25; 27(1): 60−68 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 农业生物技术 马铃薯腐烂茎线虫L 型半胱氨酸蛋白酶新基因 (Dd-cpl-1) 的克隆与序列分析 1,2 2 1 2 2 2 王高峰 ，彭德良 ，孙建华 ，黄文坤 ，彭焕 ，龙海波 1 天津师范大学生命科学学院，天津 300387 2 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193 摘 要: L 型半胱氨酸蛋白酶基因 (Cathepsin L-like cysteine proteinase gene) 为与植物寄生线虫寄生能力相关的多功能 基因。运用RT-PCR 和RACE 的方法从马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchus destructor 中克隆出1 个L 型半胱氨酸蛋白酶新 基因 Dd-cpl-1 (GenBank 登录号为 GQ180107) 。该基因Dd-cpl-1 cDNA 全长序列含有 1 个 1 131 bp 的开放性阅读框 (ORF) ，编码376 个氨基酸残基，其5′末端及3′末端分别含有29 bp 和 159 bp 的非编码区 (UTR) 。Dd-cpl-1 内含子外显 子结构分析结果表明，其基因组序列包含7 个内含子，且各内含子两端剪接位点序列遵守GT/AG 规则。Dd-cpl-1 基因 推定的蛋白Dd-CPL-1 与松材线虫L 型半胱氨酸蛋白酶高度同源，一致性达到77 ％。以不同物种中L 型半胱氨酸蛋白 酶氨基酸序列进行比对分析，推测推定的蛋白 Dd-CPL-1 含有 L 型半胱氨酸蛋白酶基因家族高度保守的催化三联体 (Cys183 ，His322 和 Asn343) 以及ERFNIN 基系和 GNFD 基系。半胱氨酸蛋白酶系统发育分析表明，Dd-cpl-1 属于由 L 型半胱氨酸蛋白酶组成的进化分支。Dd-cpl-1 的这些序列特征进一步表明其为 L 型半胱氨酸蛋白酶基因。这是首次在 马铃薯腐烂茎线虫中克隆到的L 型半胱氨酸蛋白酶，为今后在蛋白水平对其进行进一步的功能分析提供基础。 关键词: 马铃薯腐烂茎线虫，L 型半胱氨酸蛋白酶，Dd-cpl-1 Cloning and sequence analysis of a new cathepsin L-like cysteine proteinase gene from Ditylenchus destructor 1,2 2 1 2 2 2 Gaofeng Wang , Deliang Peng , Jianhua Sun , Wenkun Huang , Huan Peng , and Haibo Long 1 College of Life Sciences, Tianjin Normal University, Tianjin 300387, China 2 The State Key Laboratory for Biology of Plant Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection , Institute of Plant Protection , Chinese