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第四章 生产菌种的扩大培养 目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按10%的种子量(接 种比例)计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子液。要从保藏在试管斜面中的微 生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。其生产方法 与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快 慢；产孢子能力的大小；及对营养、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此，种 子扩大培养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够 的种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。种子液 质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。 种子扩大培养：将保存在砂土管、冷冻(干燥)管中处于休眠状态的生产菌种接入试 管斜面，活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过 程。 种子：经过上述种子扩大培养过程得到的纯种培养物称为种子。 种子扩培的目的：接种量的需要；菌种的驯化； 缩短发酵时间、保证生产水平； 发酵生产对种子的要求： 1. 细胞的生长活力强，接种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； 2. 生理性状稳定； 3. 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求； 4. 无杂菌污染； 5. 保持稳定的生产能力。 第一节 种子的制备过程 种子制备的过程大致可分为：实验室种子制备阶段 和生产车间种子制备阶段 实验室阶段：所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂中这些培养过程 一般都在菌种室完成。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，在工程上一般归为发酵车间管理。 一、实验室种子的制备 实验室种子制备有两种方式：固体培养法，适用于产孢子能力强、孢子发芽、生长 繁殖快的菌种，孢子可直接作为种子罐的种子。操作简便，不易污染杂菌。液体培养 法，适用于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种。 (一)孢子的固体制备法 1.霉菌孢子的制备 霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基；培 养的温度一般为25～28˚C；培养时间一般为4～14天。 2.放线菌孢子的制备 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养 成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28˚C。培养时间 为5～14天。 (二) 液体种子制备 1.好氧培养 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可采用摇瓶液体培养法。将孢子经摇瓶 培养成菌丝后再进人种子罐，这就是摇瓶种子。如产链霉素的灰色链霉菌（S.griseus） 和产卡那霉素的卡那链霉菌（S.Kanamuceticus）。目的就是让孢子发芽长成健壮的菌 丝。 2.静置培养法 将接有菌种的试管斜面或克氏瓶转接到三角瓶液体培养基中静置培养，在转接到种 子罐的培养过程中也无需通风。例如： 生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基的斜面上，于4℃冰箱内保 藏。每年移种3-4次。从三角瓶到卡氏培养罐培养期间，均需定时摇动或通气，使酵 母菌液与空气接触，以有利与酵母菌的增殖。 二、生产车间种子制备 生产车间种子制备即实验室制备的孢子或液体种子移种至种子罐扩大培养的过程。 好氧发酵过程的种子,需供给足够的无菌空气，和搅拌，使菌体在培养液中均匀分布， 获得相同的培养条件。 1 种子罐级数的确定 种子罐的作用： 在种子罐中，微生物细胞增殖或孢子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能 迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。 种子罐级数：制备种子需逐级扩大培养的次数。决定于2个因素：1所采用发酵罐的容 积；2. 菌种生长特性和孢子发芽及菌体繁殖速度；如： 细菌、酵母菌：生长快，种子用量比例少，种子级数较少。 茄子瓶→一级种子罐→发酵罐 （二级发酵） 霉菌：生长较慢，种子用量比例较大。 孢子悬浮液→一级种子罐→二级种子罐→发酵罐 （三级发酵） 放线菌：生长更慢，种子用量比例较大。 孢子悬浮液→一级种子罐→二级种子罐→三级种子罐→发酵罐（四级发酵） 2 确定种子罐级数需注意的问题 种子级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量的影响。种子级数越大，工艺就越难 控制、易染菌、易变异，管理困难，一 般2-4级。种子级数越