EGFR基因突变检测试剂盒（PCR-荧光探针法）.PDF

EGFR 基因突变检测试剂盒 （PCR-荧光探针法） 【产品名称】 通用名称：EGFR 基因突变检测试剂盒 （PCR-荧光探针法） 【包装规格】 大包装，24 人份/盒； 或单管单人份，24 人份/盒。 【预期用途】 本试剂盒用于定性检测石蜡包埋的人肺癌组织样本中EGFR 基因第 18、19、20、21外显子的突变状态，其中，包括 18外显子的3种单碱基突变：G719A、 G719S和G719C；19 外显子的19种缺失突变：E746-A750del(1) 、E746-T751I、E746-A750del(2）、E746-T751del 、E746-S752V 、E746-T751A 、E746-S752A 、 L747-A750P （12422）、L747-T751Q 、E746-S752D 、L747-E749del 、L747-A750P （12382）、L747-T751P 、L747-T751del （6254）、L747-S752del 、 L747-P753Q、L747-T751S 、L747-T751del （12369）和L747-P753S；20 外显子的2 种单碱基突变：T790M、S768I 和3 种插入突变：V769-D770insASV、 D770-N771insG 、H773-V774insH；21外显子的2 种单碱基突变：L858R 和L861Q （具体见附表 1）。 用于预测转移性非小细胞肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂药物的治疗效果，指导临床制定合适的治疗方案。 表皮生长因子受体 （EGFR）是一种人细胞膜表面的糖蛋白受体，该基因位于人类7 号染色体，由28个外显子组成。EGFR 具有酪氨酸激酶活性，是原癌 基因c-erbB1 的表达产物，其酪氨酸激酶功能区由外显子 18-24 编码。EGFR 主要通过RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK 信号通路和PI3K-PDK 信号通路将胞外信 号转化为胞内信号，从而对细胞的生长、增殖、分化和凋亡产生作用。 肺癌是我国发病率和死亡率最高的肿瘤，其中非小细胞肺癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC)约占所有肺癌的80%，而我国NSCLC 患者中50%以上存 在EGFR 基因体细胞突变。现有研究表明EGFR 基因突变存在多种形式，部分突变与EGFR 酪氨酸激酶抑制剂的疗效相关，部分突变与EGFR 酪氨酸激酶抑 制剂的耐药相关。因此，在使用酪氨酸激酶抑制剂进行靶向治疗前，2011年NCCN 《非小细胞肺癌临床实践指南 （中国版）》推荐进行EGFR 基因突变检测， 从而基于患者肿瘤DNA 中EGFR 基因的突变状态来指导临床制定合适的治疗方案。 本试剂盒为定性评价EGFR 基因的突变状态，检测结果仅供临床靶向药物选择参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。 【检验原理】 本试剂盒选择EGFR 基因18-21号外显子为靶区域，基于实时PCR 技术设计针对该区域29种突变的特异性引物和荧光探针组合，同时在突变位点所在区 域设计加入可提高突变位点识别能力的野生型DNA 封闭剂，并选择EGFR 基因的2 号外显子作为靶区域设计了内对照引物探针对样本和实验过程加以监控。 将提取得到的基因组核酸加入以DNA 聚合酶等成份组成核酸扩增体系中；使用荧光PCR 仪进行快速PCR 扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出 实时扩增曲线，实现对突变位点的检测。 【主要组成成分】 表 1：试剂盒主要组成成分 （大包装，8人份/盒） 组分名称 规格 数量 主要成分 质控品 EGFR 阳性质控品 180µl/管 1 EGFR基因突变质粒和人类野生型DNA 的混合物 EGFR 阴性质控品 180µl/管 1 纯化水 PCR 检测试剂 EGFR 外对照反应液 888µl/管 1 EGFR 特异性引物、荧光探针，Mg 离子，野生型 （适用于大包 G719X 反应液 888µl/管 1