《中型艾美耳球虫分离及ITS-2序列测定》-毕业论文（设计）.docVIP

精品 PAGE PAGE 2 精品 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u 引言 3 1材料与方法 5 1.1 实验器材： 5 1.2无球虫兔的培育 5 1.3单卵囊分离及接种 5 1.4继代增殖 6 1.5球虫卵囊的纯化 7 1.6 球虫DNA模板的制备 7 1.7 PCR反应体系 8 1.8 PCR产物测序 9 2 结果 9 2.1纯种分离结果 9 2.2继代增殖获得的卵囊 9 2.3 PCR扩增结果 10 2.4 PCR产物测序 10 3讨论 11 4结论 11 参考文献 12 致谢 13 精品 PAGE 1 中型艾美尔球虫分离及ITS-2序列测定 （动物科技学院 动植物检疫） 摘要： 采用单卵囊分离技术，根据形态特征鉴定并分离中型艾美尔球虫，接种无球虫兔后获得纯种卵囊，CTAB法提取孢子化卵囊基因组DNA。利用艾美耳属球虫18S rDNA保守引物，PCR扩增中型艾美尔球虫ITS-2片段，产物纯化后测序。结果：成功分离中型艾美尔球虫， PCR扩增出清晰条带，大小为434bp，得到中型艾美尔球虫ITS-2基因序列。 关键词：中型艾美尔球虫，单卵囊分离，ITS-2，PCR，测序 The Pure Species Isolation and Sequencing of ITS-2 rDNA of E. media Wang Chunguang (Quarantine of animal and plants ,Colloge of Animal Science and Technology, Hebei North University ) Guide Teacher: Gu Xiaolong Abstract: Through morphological identification, the pure species of Eimeria media was isolated by single-oocyst separation technology. Then the single oocyst was inoculate to free-coccidia rabbits in order to multiplicate E.media. Genomic DNA was extracted from the sporulated oocysts by the method of CATB. Using conservative primer of 18S rDNA of Eimeria, ITS-2rDNA gene fragments of E.media was amplified and sequenced. The results indicated that the gene fragments of E.media was 434bp, and the ITS-2 rDNA sequence of E.media was obtained. Key word: E.media; Single oocyst separation;ITS-2;PCR;Sequence 引言 兔球虫病（rabbit coccidiosis）是一类由艾美耳及其它属（Eimeria）的球虫寄生于家兔肝胆管及肠上皮细胞内而引起的寄生性原虫病，流行非常普遍，世界各地均有发生。各种品种的家兔对兔球虫都有易感性，幼兔感染率高达90%以上，死亡率高达40%~70%，其中以断奶后至3月龄的幼兔最为易感，感染率可达100%，死亡率可达70%以上[1]。该病对养兔业危害极大，我国将兔球虫病列为二类动物疫病之一。 兔球虫病一年四季都可发生,但以6~8月份为高发期，特别是在兔舍卫生条件差、饲养制度突然改变、饲养密度过大以及高温高湿的环境气候等情况下更易多发。各品种的家兔都易感染,特别是断奶到3月龄的仔兔最易发病，仔兔的感染主要是由于吸吮了沾有球虫卵囊的母兔乳头或吃了被病兔粪便污染的饲料和饮水引起,据聂奎等[2]报道,幼兔的球虫感染率为90%,死亡率为60%。幼兔的感染主要是吃了被卵囊污染的草、料或饮水造成的。此外，球虫卵囊也可通过饲养员、工具、鼠类等进行机械性传播。兔舍卫生条件所造成的饲料与饮水的污染最易造成本病的发生和传播。成年兔多为带虫者，在球虫病的传播中起着重要的作用[3]。耐过球虫病未死亡的,或经治愈的家兔成为长期带虫者,并成为该病的传染源。此病给养兔生产造成很大的损失,是养兔生产中长期存在的一个难题[4]。因此兔球虫的研究引起科技工作者的充分重视，多年来，国内外学者对兔球虫的种类、形态、病理变化、致病机理、