基因工程课件总结.docx

PAGE 14 基因工程要点：按预先设计的蓝图，进行基因重组，导入受体细胞，产生新的性状 第一章 1、基因工程：是在分子水平上进行的遗传操作，是指一种或多种生物体的基因或基因组提取出来，或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计、经过体外加工重组，转移到另一种生物体的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。 2、基因工程的三大要素：供体、受体、载体 3、遗传工程与基因工程的关系：广义的遗传工程包括细胞工程和基因工程；狭义的遗传工程就是基因工程。一般所说的遗传工程多指基因工程，它们在具体内容上彼此相关，许多情况下混用。 4、基因工程形成的三大理论： （1）证明了DNA是遗传物质 （2）揭示了DNA分子的双螺旋结构的模型和半保留复制的机理 （3）中心法则（遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定） 5、基因工程形成的三大技术 （1）限制性内切酶的发现与DNA的切割 （2）DNA连接酶的发现与DNA片段的连接 （3）基因工程载体的研究与应用 6、基因工程的基本操作程序（切、接、转、增、检、分、PCR） （1）从供体生物的基因组中分离获得带有目的基因的DNA片段 （2）限制性核酸内切酶分别将外源DNA和载体分子切开 （3）DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段接到载体分子上，形成DNA重组分子 （4）将重组DNA分子引入受体细胞 （5）带有重组体的细胞培养扩增，获得大量的细胞繁殖群体 （6）筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效稳定表达的基因工程细菌或细胞 （7）将选出的细胞克隆的目的基因进一步研究分析，并设法使之实现功能蛋白的表达 7、基因工程的研究内容：基础研究、克隆载体研究、受体系统研究、目的基因的研究、生物基因组学研究、应用研究等。 8、1973年，被定为基因工程的诞生元年。 9、基因工程的应用： （1）医药生产：基因工程主要用于体内合成的极其重要的但量极少的肽类生产和疫苗的制作中，如：用于治疗病毒感染和癌症的干扰素，乙肝疫苗等。 （2）基因诊断：采用基因工程技术，就能用基因探针方便对异常基因结构进行分析。如：地中海贫血症；甲型血友病等。 （3）品种改良：主要用于农业、畜牧业优良品种的培育和改良，以提高生物的抗病能力，农产品产量。 （4）基因治疗：肿瘤疾病的治疗 （5）工业方面：超级细菌快速分解石油；微生物生产氢。 第二章 1、宿主细胞的限制与修饰作用：宿主细胞存在一个酶系统，这个系统能限制外来DNA的入侵，同时对自身DNA进行修饰保护。 来自A菌株的噬菌体不能侵染同种类的B菌株——限制 而来自A菌株的噬菌体侵染A菌株不受限制的现象称为修饰 限制与修饰是由菌株细胞的限制—修饰系统控制——宿主的限制与修饰现象 1.1在发现限制性内切酶工作中作出贡献的科学家W.Arber、H.Smith和D.Nathans 荣获了1978年诺贝尔生物医学奖 1.2宿主控制的限制与修饰现象有两方面的作用：一是保护自身DNA不受限制；二是破坏入侵的外源DNA，使之降解。 2、大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示，它有以下四种表型： （1）野生型，具有完整的限制与修饰功能 （2）限制缺陷型，不能降解外源DNA，但具有修饰功能，这类突变株经常用于转化 （3）限制和修饰缺陷型，既无限制功能，又无修饰功能，也常用于转化实验 （4）修饰缺陷型，缺乏修饰自身DNA的功能，但具有限制功能，故也成为“自杀性表型”。 2.1、限制性内切酶的类型及其特性（课本22页表格）Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型 3、Ⅱ型限制性核酸内切酶的特性 （1）2单：酶为单一肽链，单一酶切特性，无其它功能 （2）2特：酶在特定的序列，特定的位置进行特异性切割（特异识别，特异切割） （3）2点：酶作用需要Mg镁离子、缓冲液 4、限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的限制性核酸内切酶，切断的双链DNA都具有5磷酸基和3羟基末端。 5限制酶特征:1、限制酶识别靶序列同DNA的来源无关2、限制酶识别靶序列是惟一的 5.1已知大多数Ⅱ型限制型核酸内切酶均在其识别位点内部切割双链DNA，水解磷酸二酯键中3位的酯键，产生3端为羟基，5端为磷酸基团的片段。 6、区分名词 回文结构：双链DNA中含有的两个结构相同、方向相反地序列称为反向重复序列，也称同文结构。 粘性末端：两条链上的断裂位置是交错的，但又是围绕着一个对称结构的中心，这两个突出末端都能在适当的温度下退火互补。 平末端：在识别序列的对称轴上同时切割，形成平末端。 同裂酶：来源不同能识别相同的序列，切割方式相同或不同；其中识别位点与切割均相同的酶。 同尾酶：来源不同，识别序列也不同，但切割后能产生相同粘