中药提取分离和纯化精编版.ppt

2．分配薄层色谱 分配薄层色谱的原理和纸色谱相同。装置及操作与吸附薄层色谱相同，只是铺板用的不是吸附剂而是支持剂。在分配色谱中流动相应先用固定相饱和，否则在展开过程中，流动相流过支持剂就把支持剂上的固定相带走一部分或全部，最后只剩下支持剂，就不再是分配色谱了。 3．分配柱色谱 装置同吸附柱色谱。将吸附固定相的支持剂装于柱中，样品溶于少量固定相加入柱上端，以移动相进行洗脱，分别收集。 三、离子交换色谱法 (一)基本原理 (二)操作 （三 ）离子交换色谱的应用 。 (一)基本原理 离子交换树脂解离的阳离子或阴离子和水溶液中的离子发生交换作用，并被吸附到柱上；再用强离子浓度的水溶液进行可逆交换，使被分离成分从柱上洗脱下来，即可实现分离。用于离子型成分的精制及解离有差异成分的分离。 离子交换剂所含的可解离基团解离后，留在母体上的为阳离子的称阴离子交换剂，反之为阳离子交换剂。阳离子交换剂可以和溶液中的阳离子交换；阴离子交换剂可以和溶液中的阴离子进行交换。一种离子交换剂和溶液中不同离子交换能力不同。当不同的离子在柱上进行洗脱时，它们各自在柱上移动速度也不相同，最后可以完全分离。 (二)操作 　离子交换柱色谱操作方法与前述柱色谱法基本相似，包括装柱、上样、洗脱等步骤 （三 ）离子交换色谱的应用 氨基酸、肽类、生物碱、有机酸和酚类等和分离 四、凝胶色谱法 凝胶粒子是具有网状结构的高分子水不溶性物质。分子内具有许多一定大小的孔隙。孔的大小，取决于制备凝胶时加交联剂的程度，加交联剂量高，则孔小；加交联剂量低，则孔大。 (二)分离原理 　 凝胶具有分子筛的过滤作用。受网孔半径限制，大分子不能渗入凝胶颗粒内部，随洗脱剂在颗粒间隙移动，先被洗脱；小分子可自由渗入并扩散到凝胶颗粒内部，通过色谱柱时阻力增大，洗脱时后流出。 （三）应用 　　凝胶色谱法目前已被广泛应用于天然药物有效成分的分离纯化工作中，是水溶性大分子化合物分离上常用的方法之一，实践证明它对小分子量物质的分离也是有效的。随着新的凝胶材料的不断问世，凝胶色谱法的应用范围也在不断扩大。 五、高效液相色谱法 　 高效液相色谱法也称高压液相色谱法。它是在经典的液相柱色谱的基础上发展而成的一种高效、快速、高灵敏的色谱分离方法。根据柱内填料的不同及不同的分离机制，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱及凝胶色谱。由于采用了高效填充剂，并配以高压输液泵、高灵敏检测器、自动记录装置及自动收集装置，使高效液相色谱法的分离速度及效率均大大提高，更趋于仪器化、自动化，且适用范围广。 制备型的HPLＣ能大量分离制备较纯的试样。随着计算机技术的不断发展，HPＬＣ与质谱、核磁、红外等波谱技术的联用进展很快。在天然药物化学成分的研究领域中，HPLＣ发挥着越来越重要的作用。 六、气相色谱法 气相色谱法是一种以气体为流动相的色谱分离方法。 根据固定相的不同，可分为气－固吸附色谱及气液分配色谱两类。以气－液分配色谱的应用最普遍。依据混合物各组分在气－固或气－液两相的吸附能力的不同或分配系数的差异进行分离。具有分离效率高，分析速度快，试样用量少(气体试样可为l mI，液体试样为0.1ml，固体试样可为几微克)等优点。特别适用于具有沸点低、易挥发特性的挥发油成分的分离、鉴定和定量分析。 　　　　　此外还有逆流分溶法，滴滴逆流分配法 分配色谱法是利用成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数不同而达到分离的一种色谱方法。 离子交换色谱是以离子交换树脂作为固定相，以水或含水溶剂作为流动相，在流动相中存在的离子性成分与树脂进行交换而被吸附进行分离的方法。 离子交换色谱是以离子交换树脂作为固定相，以水或含水溶剂作为流动相，在流动相中存在的离子性成分与树脂进行交换而被吸附进行分离的方法。 离子交换色谱是以离子交换树脂作为固定相，以水或含水溶剂作为流动相，在流动相中存在的离子性成分与树脂进行交换而被吸附进行分离的方法。 离子交换色谱是以离子交换树脂作为固定相，以水或含水溶剂作为流动相，在流动相中存在的离子性成分与树脂进行交换而被吸附进行分离的方法。 3、结晶纯度的判断 　 一种纯的化合物通常都具有一定的晶形和均匀的色泽，以及一定的熔点和较小的熔距。故可根据结晶的色泽是否均匀、晶形是否一致、熔点是否一定及熔距是否较小，并结合纸色谱或薄层色谱技术，对结晶纯度加以判断。如果经数种不同的展开剂系统展开后均为一近乎圆形的斑点，即可判断结晶的纯度较高。 （九） 色谱分离法 色谱法是一种分离和鉴定复杂混合物的有效方法。近年来已被广泛应用于天然药物有效