目的基因的连接转化refresh.pptVIP

离心期间讲解。 离心期间讲解。 摇荡培养45分钟期间讲作；重组DNA的转化录象。 * 实验三、 PCR 产物的电泳、回收 目的基因的连接、转化 ? 实验内容 1. PCR产物的电泳、回收； 2. PCR产物与T载体的连接 3. 感受态细胞的制备 ； 4. 连接产物的转化； 5. 铺制LB培养平版； 6. 涂菌培养过夜 。 ? 实验回顾 RNA提取 RT-PCR 目的 DNA片段 质粒 TA载体 连接 重组质粒 目的 DNA 转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 PCR 平板筛选 一、 PCR产物的电泳及回收 1）PCR产物电泳： 15ul产物+3ul上样液 1%琼脂糖凝胶，100伏，30分钟。 8:10~~9:20 预期PCR电泳结果 结合片子讲切胶的问题 (不要切引物） 2） PCR产物的回收（挤胶法） ? （1）在UV灯下，用手术刀片将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下，放入封口膜中； （2）将切下来的胶块，标记好姓名，-20℃冰箱中 。 （3）放在封口膜内直接挤压，用加样器吸取挤压后得到的液体。 1、 冻融法： 1）? 在UV灯下，用手术刀片将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下,-70oC冷冻