Exp07碱变性提取质粒DNA.pptVIP

实验七 质粒DNA的提取 一、实验目的 二、实验原理 变/复性的差异 ?细胞裂解 ?Ⅰ:Ⅱ:Ⅲ=1:2:1.5 ?乙醇沉淀 溶液和试剂 四、实验步骤 (1) 1.5ml菌液/组, 12k, 2? (2) 100?l SolⅠ,振荡1?,室温5? (3) 200?l SolⅡ,颠倒3次,冰浴3? (4) 150?l Sol Ⅲ, 混匀,冰浴5? (5) 12k,离心10?,转移上清 操作步骤 (6) 等体积PCI,混匀,12k, 5?,转上清 (7) ?vol 3M NaAc (pH5.2),2?vol alc (8) ?20℃放置30?, 12k,离心10? (9) 0.3ml预冷70%alc洗沉淀, 12k, 5?,干燥 (10) 沉淀溶于20?l TE(含RNase A 20?g/ml), 37℃水浴30?,?20℃保存 注意事项 摇菌时施加选择压 收集菌体时尽量除尽水分 加溶液Ⅱ、Ⅲ后,勿剧烈振荡 SDS质量影响产率 五、作业 思考题P128 2、3、4 1. 抽提质粒的基本原理是什么？ 2. 在碱法提取质粒DNA操作过程中应注意哪些问题？ 3. 质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有何作用？ * 熟悉提取质粒DNA基本原理. 掌握少量制备质粒DNA的碱裂解方法. 三、实验材料、用具 菌株:E.coli转化子 用具:恒温摇床,培养箱,冰浴,灭菌锅,超净台,移液器,枪头, EP管