反胶团萃取学习资料.pptVIP

（3）溶解法 对于固体粉末中含有的生物大分子，或不溶于水的生物大分子，可采用溶解法进行。 3.1 蛋白质溶入反胶团的推动力 蛋白质溶解于反胶团的主要推动力是表面活性剂与蛋白质的静电相互作用。 此外，反胶团与蛋白质等生物分子间的空间相互作用对蛋白质的溶解率也有重要影响。 3.1.1 静电作用力 在反胶团萃取体系中，表面活性剂与蛋白质都是带电的分子，因此静电相互作用是萃取过程中的一种主要推动力。其中一个最直接的因素是pH值，它决定了蛋白质带电基团的离解速率及蛋白质的净电荷，这与蛋白质等电点pI有关。 即随着pH值的改变，被萃取蛋白质所带电荷的性质和带电量是不同的。 对于阳离子表面活性剂形成的反胶团体系，萃取只发生在水溶液的pHpI时，此时蛋白质与表面活性剂极性头问相互吸引； pHpI时，静电排斥力将抑制蛋白质的萃取。 对于阴离子表面活性剂形成的反胶团体系，情况正好相反。 3.1.2 空间位阻效应 反胶团“水池”的物理性能(大小、形状等)及其中水的活度是可以用Wo的变化来调节的，并且会影响大分子如蛋白质的增溶或排斥，达到选择性萃取的目的，这就是所谓的位阻效应。 许多反胶团萃取的实验研究已经表明，随着Wo的降低，反胶团直径减小，空间位阻作用增大．蛋白质的萃取率也减少。 空间位阻效应也体现在蛋白质分子大小对分配系数的影响上。在各种蛋白质等电点处的反胶团萃取实验研究表明，随着蛋白质分于量的增大，蛋白质的分配系数(溶解率)下降。当相对分子质量超过20000时，分配系数很小。 该实验在蛋白质等电点处进行，排除了静电相互作用的影响，表明随分子量增加，空间位阻作用增大，蛋白质萃取率下降。因此，也可以根据分子量的差异利用反胶团萃取实现蛋白质选择性分离。 3.2 影响反胶团萃取蛋白质的主要因素 由上述分析可知，任何可以增加蛋白质与反胶团的静电作用或导致形成较大反胶团的因素，都有助于蛋白质的萃取。影响反胶团萃取蛋白质的主要因素，见表2- 10。只要通过对这些因索进行系统的研究，确定最佳操作条件，就能得到合适的目标蛋白质萃取率。从而达到分离纯化的目的。 (1) 水相pH值的影响 水相的pH值决定了蛋白质表面电荷的状态，从而对萃取过程造成影响。当蛋白质所带的电荷与反胶团内表面电荷，也就是表面活性剂极性基团所带的电荷性质相反时，由于静电引力，可使蛋白质溶于反胶团中。 (2)离子的种类和强度的影响 与反胶团相接触的水溶液离子强度以几种不同方式影响着蛋白质的分配。 ①离子强度增大后，反胶团内表面的双电层变薄，减弱了蛋白质与反胶团内表面之间的静电吸引，从而减少蛋白质的溶解度。 ②反胶团内表面的双电层变薄后，也减弱了表面活性剂极性基团之间的斥力，使反胶团变小，从而使蛋白质不能进入其中。 ③离子强度增加时，增大了离子向反胶团内“水池”的迁移并取代其中蛋白质的倾向，蛋白质从反胶团内再被盐析出来。 ④盐与蛋白质或表面活性剂的相互作用，可以改变溶解性能．盐的浓度越高，其影响就越大。 阳离子的种类对萃取率的影响 如Mg2+、Na+、Ca2+、K+对萃取率的影响主要体现在改变反胶团内表面的电荷密度上。通常反胶团中表面活性剂的极性基团不是完全电离的，有很大一部分阳离子仍在胶团的内表面上(相反离子缔合)。极性基团的电离程度愈大，反胶用内表面的电荷密度愈大，产生的反胶团也愈大。 表面活性剂电离的程度与离子种类有关。同一离子强度下的四种离子对反胶团的Wo的影响见表2-11。由表2 11-可知，极性基团的电荷密度按K+ 、 Ca2+、 Na+、 Mg2+的顺序逐渐增大，电离程度也相应的增大。 (3)表面活性剂的种类和浓度的影响 阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂都可用于形成反胶团，关键是应从反胶团萃取蛋白质的机理出发，选用有利于增强蛋白质表面电荷与反胶团内表面电荷间的静电作用和增加反胶团大小的表面活性剂。 除此以外，还应考虑形成反胶团及使反胶团变大(由于蛋白质的进入)所需的能量的大小以及反胶团内表面的电荷密度等因素，这些都会对萃取产生影响。 增大表面活性剂的浓度可增加反胶团的数量，从而增大对蛋白质的溶解能力。但表面活性剂浓度过高时，有可能在溶液中形成比较复杂的聚集体，同时会增加反萃取过程的难度。 因此，应选择蛋白质萃取率最大时的表面活性剂浓度为最佳浓度。 (4)溶剂体系的影响 溶剂的性质，尤其是极性，对反胶团的形