中华绒螯蟹血清凝集素的分离纯化与性质研究.pdf

第27卷第9期 水 产 科 学 v01．”No．9 SCIENCE 2008年9旦 FISHERIES s印．2008 中华绒螯蟹血清凝集素的分离纯化与性质研究 徐海圣1，徐步进2 (1．浙江大学动物科学学院，浙江杭州310029；2．浙江大学原子核农业科学研究所， 浙江杭州310029) 摘要：运用硫酸铵盐析和GlcNAc—Sepharose6B亲合层析等方法从中华绒螯蟹的血清中分离出一种 天然的凝集素，经SDS—PAGE测得其分子量约为82 kD，由单一亚基组成，由等电聚焦凝胶电泳测得其 等电点(pi)为5．4。糖凝集抑制试验中检测到葡萄糖、半乳糖、甘露糖、乳糖、果糖和蔗糖对中华绒螯蟹 血清凝集素均没有抑制作用，但N一乙酰氨基糖GIcNAe、GalNAc和ManNAc等能抑制其凝集活性。热 变性试验结果表明，温度为10～50℃，凝集素仍保持强的凝集活性，但温度升至60℃后，凝集活性迅 速下降，至80℃失去凝集活性，在pH 4．0—8．O的各缓冲液中保持较强的凝集活性，而在此pH范围 外，凝集活性均有不同程度的下降。中华绒螯蟹血清凝集素可使外源红血细胞发生凝集，还具有凝集 细菌或抗菌作用。 关键词：中华绒螯蟹；凝集素；纯化；性质 中图分类号：Q959．223 文献标识码：A 文章编号：1003一111l(2008)09-0455-07 凝集素广泛存在于生物体中，目前在高等植 1．2中华绒螯蟹血淋巴液的采集及血清的制备 物、动物、海藻、真菌中均有发现¨引，是非免疫起源 取中华绒螯蟹擦干体表水分后，用无菌注射器 的蛋白质或糖蛋白，具有凝集细胞、抑制肿瘤细胞 于螯足第二关节处抽取血淋巴，置于Eppendorf管 000 增殖、激活淋巴细胞、抑制血小板凝集等多种生物 中4℃过夜，10 r／min冷冻高速离心，吸取血 活性拍‘71。人们还发现无脊椎动物体内凝集素具有 清，冰箱一20℃保存备用。 代替免疫球蛋白的功能，在异物识别等机体防御中 1．3红血细胞和细菌悬液的制备 发挥着重要的作用¨J。甲壳动物缺乏特异性免疫， 兔、小白鼠购于浙江大学医学院实验动物中 而体液中的凝集素具有免疫功能¨J。目前，甲壳动 心，鸡、鸭、牛蛙(Rana 物的免疫功能研究日益受到国内外学者的广泛重 autaluJ)、中华鳖(Trionyxsinensis)购于杭州市农贸 视，已对斑节对虾(Penaeusmonodon)一J、日本对虾市场，人血细胞购于浙江省中心血站；嗜水气单胞 (P．japonicus)n¨21、印度对虾(P．ind／cus)E13]、锯菌(Aeromonas 缘青蟹(Scyllaserrata)[14J及中国(明)对虾(Fenner-ae)、副溶血弧菌(Vibrio openaeuschinensu)¨孓1。¨等几种海洋经济甲壳动物验室从患病中华绒螯蟹或中华鳖体内分离而来。 血清凝集素进行了研究，而有关中华绒螯蟹(Erio—以肝素钠(0．05％m／m)为抗凝剂，分别采集上述 cheir r／ sinensis)的血清凝集研究较少。笔者对中华绒动物的血液，用0．9％生理盐水充分洗涤。1000 螯蟹血淋巴凝集素的分离纯化与部分性质进行分 rain离心3min，弃上清液，重复洗涤4次，最后一次 析，以期为其