_聚赖氨酸测定方法的改进.docVIP

第 22卷 第 2期 2007年 6月 V ol.22 No. 2 Jun. 2007 收稿日期:2006-10-30; 修回日期:2007-01-17 基金项目:国家“十五”科技攻关项目(2004BA713B05-061 ;天津科技大学自然科学基金资助项目作者简介:曹伟锋(1981— ,男,河南人,硕士研究生 . ε-聚赖氨酸测定方法的改进 曹伟锋,谭之磊,袁国栋,贾士儒 (天津科技大学生物工程学院,天津市工业微生物重点实验室,天津 300457 摘 要 :研究了甲基橙法测定ε-聚赖氨酸的试验条件 , 得出结论:甲基橙从水中重结晶后 , 溶于 pH6.6、 0.1 mol/L磷 酸钠缓冲液中 , 终浓度为 1 mmol/L; 将 2 mLε-聚赖氨酸溶液与 2 mL 1 mmol/L甲基橙溶液混合; 混合物在 30℃条件 下剧烈振荡 30 min , 4 000 r/min离心 15 min; 取 1 mL 上清液稀释 50倍 , 在 465 nm 波长下测吸光度 , 计算ε-聚赖氨酸 含量. 关键词 :甲基橙; ε-聚赖氨酸;比色法 中图分类号 :O657.3 文献标识码 :A 文章编号 :1672-6510(2007 02-0009-03 Improvement of the Assay Method forε-polylysine CAO Wei-feng , TAN Zhi-lei , YUAN Guo-dong , JIA Shi-ru (College of Biotechnology, Tianjin University of Science Technology, Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology, Tianjin 300457, China Abstract :The conditions of detecting ε-polylysine (ε-PL concentration by the methyl orange were studied in the paper. Theresults were as follow. After recrystallization from water,methyl orange was dissolved in 0.1mol/L sodium phosphate buffer (pH6.6 at a final concentration of 1 mmol/L. Then 2ml ε-PL solution was mixed with 2ml methyl orange solution. The mixtureswere vigorously reacted on a reciprocal shaker at 30℃ for 30min and then centrifuged for 15min at 4000 r/min. The absorbanceof the supernate diluted 50-fold was read at 465nm and the ε-PL content was calculated. Keywords :methyl orange; ε-polylysine;colorimetric method 1972年 Itzhaki [1]根据甲基橙与聚赖氨酸间形成 复合物的特性 , 建立了用甲基橙测定聚赖氨酸含量的 方法 . 1973年 M.hatano [2] 研究了聚-L -赖氨酸-甲基 橙反应体系中的旋光性 , 证实依靠甲基橙分子磺酸基 上阴离子与聚赖氨酸氨基阳离子间形成的离子对 , 在 pH3~10范围内聚赖氨酸能和甲基橙形成复合物 , 且 形成的离子对发生在一个或两个甲基橙分子与聚赖 氨酸一个氨基残基上 . 1977年日本学者 S.shima [3]和 H.sakai 从放线菌培养过滤液中提取出一种含有 25~30个赖氨酸残基的同型单体聚合物 , 这种赖氨酸聚合 物是赖氨酸残基通过 α-羧基和与另一赖氨酸残基的 ε-氨基形成酰胺键连接而成 [4] , 称为 ε-聚赖氨酸 (ε-PL , ε-PL 的测定按照 Itzhaki 在 1972年建立的 测定方法进行 . 在国内 , 董惠钧 [5]和姜俊云 [6]首先借鉴 Itzhaki 的方法 , 用甲基橙测定 ε-PL , 但由于发酵液成 分的复杂性 , 造成测定结果重现性差 . 因此 , 本文通过 研究测定条件及发酵液中存在因素对 ε-PL 测定的影 响 , 确定了甲基橙法测定 ε-PL 的条件 . 1 材料与方法 1.1 试剂及仪器 甲基橙 , 天津市凯通化学试