TGF-βSmad信号通路在哮喘气道重塑中的作用及调控.docVIP

TGF-β/Smad信号通路在哮喘气道重塑中的作用及调控 1、项目研究意义 支气管哮喘（简称哮喘）严重影响着儿童的健康，造成儿童缺课、活动受限、学习成绩和生活质量下降及家长缺勤和医疗费用的增加，已成为儿童最常见的慢性疾患之一。WHO将其列入21世纪急需防治的重大疾病之一，成为亟待攻克的医学难题。因此，研究其发病机理，探讨药物作用机制具有重要意义。 气道重塑是慢性哮喘的病理生理特征之一，表现为气道平滑肌和基底膜增厚、细胞外基质沉积和腺体增生肥大，其结果是导致气道高反应性(AHR)和不可逆性气流阻塞，又是什么原因导致气道重塑？目前发现，转换生长因子（TGF）-β/Smad信号通路是导致哮喘气道重塑的一条重要信号通路。 TGF-β超家族包括TGF-βS、骨形态生成蛋白（BMP）和苯丙酸诺龙（activins）等，TGF-βS分为TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三个亚类，TGF-β1是由双链完全相同12.5KD单体经二硫键连接的25KD双链蛋白多肽。Holgate等“上皮-间充质营养单位学说”提出哮喘气道上皮细胞正常修复机制受损，引起TGF-β受体和表皮生长因子（EGF）受体分泌失衡，导致气道重塑，是难治性哮喘重要发病机制[1]。TGF-β1被认为是哮喘气道重塑的主要调控因子，直接影响气道壁胶原沉积[2]。Chu等研究证实，TGF-β1在哮喘患者气道上皮及黏膜明显增多，其表达与气道基底膜厚度、成纤维细胞数目和（或）哮喘发作的严重程度呈正相关。Okona-Mensah等研究显示，向牛血清培养基中加入TGF-β1可刺激气道平滑肌细胞DNA合成，促进细胞分裂增殖。提示TGF-β1参与并促进哮喘气道重塑过程，抑制TGF-β1表达可阻止或减轻气道重塑。 最近发现，Smads蛋白是TGF-β信号通路重要成员，是TGF-β受体复合物的下游信号调节蛋白，在该信号通路中起中介和调节作用，可将信号从胞膜直接传至胞核，介导TGF-β胞内信号转导。何谓Smads蛋白家族？它是一个在脊柱动物、昆虫和线虫内发现的转录因子家族，是迄今为止唯一已被证实的TGF-β受体作用底物。Raftery等在对果蝇遗传系统筛选中,发现可补救dpp缺失突变的分子,称Mad(mothers against dpp),它是Dpp受体信号传递必需的下游效应分子。随后在线虫中克隆出Mad相关基因Sma2、3、4,它们是Mad同源物,可形成复合物协同发挥作用,遂将Mad与Sma组合统一命名为Smad。由于Mad相关蛋白与其它任何已知蛋白结构上无相似性,故称为Smads蛋白家族。Smads蛋白家族结构和功能特点决定了其信号转导的多样性[3]，分为3类：(1)受体调节型Smads蛋白(receptor-regulated Smads,R- Smads),包括Smad1、Smad2、Smad3、Smad5和Smad8；(2)通用调节型Smads蛋白（common-mediator Smads,Co- Smads）即Smad4；(3)抑制型Smads蛋白（Anti- Smads）,包括Smad6和Smad7。 目前，仅知道Smad6和Smad7的功能是抑制受体激动的Smads蛋白介导的信号转导，可以阻断TGF-β介导的转录反应，Smad7较Smad6的抑制作用更显著，Smad7与活化的TGF-β的I型受体结合阻止Smad2与I型受体结合和磷酸化，抑制TGF-β信号转导。Nakao 等[4]免疫组化法发现Smad7蛋白哮喘组较正常组低表达，主要表达于支气管上皮细胞，Western blotting检测亦显示Smad7抗体正常组较哮喘组高表达。哮喘患者支气管上皮细胞Smad7表达水平与基底膜厚度及AHR成负相关，体外实验发现取消内源性Smad7表达增强TGF-β的活性，过度Smad7表达抑制TGF-β的活性。Smad7抑制气道重塑部分通过抑制TGF-β介导的转录反应。Smad2与Smad3一起被TGF-β1的Ⅰ型受体磷酸化后，可与Smad4形成异源性多聚体，并转入核内与DNA结合，激活DNA转录，调节靶蛋白表达。认为通过体外研究及基因工程阻断Smad信号通路，为哮喘气道重塑的研究和防治展示了新前景[5]。Sagara等[6]研究发现，哮喘组支气管活检样本磷酸化Smad2强表达，对照组低表达，其表达水平与基底膜厚度密切相关。Rosendahl等[7]应用卵白蛋白（OVA）致敏Balb/c哮喘小鼠研究示支气管上皮细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞中磷酸化Smad2表达水平在吸入OVA后迅速增强，而未吸入激发致敏Balb/c小鼠低表达，免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法显示正常组几乎不能检测到Smad3表达，而哮喘组其表达水平显著上调。另有研究表明，过敏原激发的哮喘模型组较正常组阳性表达的