仿刺参基质金属蛋白酶基因MMP.pdf

第43 卷 第 2 期 水 产 学 报 Vol. 43, No. 2 2019 年 2 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Feb., 2019 文章编号: 1000-0615(2019)02-0389-11 DOI: 10.11964/jfc.20171211104 仿刺参基质金属蛋白酶基因MMP-16的克隆及表达 1 1,2 1 1 李石磊 ， 杨爱馥 ， 董 颖 ， 高 杉 ， 1 1 1* 陈 仲 ， 孙红娟 ， 周遵春 (1. 辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023 ； 2. 大连出入境检验检疫局，国家水产品检测重点实验室，辽宁 大连 116600) 摘要：基质金属蛋白酶(MMPs) 是一种能够降解细胞外基质的蛋白水解酶类。为研究 MMPs在仿刺参免疫防御中的作用，本实验采用RACE技术克隆了仿刺参基质金属蛋白酶 16基因(Aj-MMP -16) 的cDNA全长序列，并对其序列特征和功能进行了初步分析；采用实 时荧光定量PCR(qRT-PCR) 方法，分别分析了Aj-MMP -16基因在仿刺参不同组织、不同 “ 化皮”体壁组织以及病原菌刺激后体腔细胞中的表达情况。结果显示，Aj-MMP -16 基因 的cDNA全长为2 976 bp ，包括一个342 bp 的5′ 非编码区，一个963 bp 的3′ 非编码区；开放 阅读框(ORF) 为1 671 bp ，编码557个氨基酸，预测蛋白分子量为63.11 ku ，等电点为 4.79 。Aj-MMP-16具有典型的MMPs家族蛋白结构：N-端前肽区、铰链区、催化区、C-端 类血红素结合区和跨膜区。Aj-MMP-16 与其他物种的MMPs具有一定的相似性，与紫色 球海胆的MMP-16相似性最高。Aj-MMP -16基因mRNA在仿刺参各组织中均有表达，表达 量由高到低为呼吸树、肠、体腔细胞、管足、肌肉、体壁；在“ 化皮病” 不同阶段，Aj- MMP-16基因mRNA在“ 化皮”体壁组织中的表达量显著高于正常体壁组织；灿烂弧菌和蜡 样芽孢杆菌刺激后，体腔细胞中Aj-MMP -16基因mRNA表达量显著升高。Aj-MMP -16基因 可能在仿刺参内脏再生、炎症发生以及免疫应答中起着重要的作用。 关键词: 仿刺参；基质金属蛋白酶；基因克隆；表达分析 中图分类号: Q 785 ；S 968.9 文献标志码: A 细胞外基质(extracellular matrix ，ECM)是指 物专一性、序列相似性和结构域组成不同可分 由细胞分泌并分布在细胞表面或细胞间隙的大 为(1)胶原酶：将三螺旋的胶原蛋白特异性切割 分子物质，由胶原蛋白、蛋白聚糖和纤维蛋白 成小的片段，主要包括MMP-1 、MMP-8 、MMP- [1-4] 13[8] ；(2)明胶酶：能够降解变性胶原和明胶，包 等组成，参与细胞生长、分化和信号传导等 。 ECM在大多数蛋白酶作用下均稳定存在，但在 括