图像流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分群及吞噬功能研究中.pdfVIP

第43 卷 第 3 期 水 产 学 报 Vol. 43, No. 3 2019 年 3 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Mar., 2019 文章编号: 1000-0615(2019)03-0563-10 DOI: 10.11964/jfc.20180711373 图像流式细胞仪在中华绒螯蟹血细胞分群及 吞噬功能研究中的应用 1 1 1 1 2 1* 胡锦丽 ， 任星潮 ， 刘逸尘 ， 孙金生 ， 耿绪云 ， 张亦陈 (1. 天津师范大学生命科学学院，天津市动植物抗性重点实验室，天津 300387 ； 2. 天津市水产研究所，天津 300221) 摘要：为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析，本研究以中华绒螯蟹 为例，依据其血细胞内具有颗粒结构的特征，与常规显微观察对比，探讨了一种基于图 像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法，并测量了体质量为(10±3) g 的中华绒螯蟹的 血细胞对直径1 μm微球的吞噬情况。结果显示，两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为 4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒，但由于缺乏精细的量化标准，批次样品 的人工辨识结果波动较大；而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象，利用高精度检 测模块测量，结果更准确、客观，而且通量高、重复性好。测量结果显示，中华绒螯蟹 血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65% 、36.68%± 6.84% 、7.80%±1.16%和16.51%±5.60% ，依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰， 缺乏过渡样点，提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证 实，中华绒螯蟹的4 类血细胞都具有吞噬功能，并以无颗粒细胞为主要吞噬类群；吞噬 微球的细胞比例在注射后6 h 内呈钟型曲线变化，4 h可达峰值(5.69%±0.44%) ，表明中华 绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明，图像流式细胞仪适合于中华绒螯 蟹的血细胞分类分析和功能研究，本研究结果为同类研究提供了重要参考，将有助于更 全面了解甲壳动物血细胞的功能。 关键词: 中华绒螯蟹；血细胞；分类；吞噬；图像流式细胞仪 中图分类号: S 945.6 文献标志码: A 中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)亦称河蟹，是 能。而利用溶于血淋巴中的各种酶类、杀伤因 我国重要的淡水养殖品种，具有极高的经济价 子及调节因子等分子清除异物和调节细胞应答 [ 1-5] 值。随着近年来养殖规模的扩大，养殖环境越 的功能则属于体液免疫 ，参与体液免疫的很 来越堪忧，病害也日益严重，导致养殖的品质 多活性分子是由各类血细胞合成并分泌的，因 和产量都显著下降，制约了该行业的进一步发 此，血细胞在甲壳动物免疫系统中占有中心地