高效液相色谱法培训教学讲义.ppt

过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 柱子不使用时，两端密封 注意柱子使用的pH范围 不要高压冲洗柱子，不要高温下过长时间的使用硅胶键合相 * 可能的原因 －检测池脏 －检测器灯能量下降 －由泵引起的脉冲 －检测器上的温度效应 －检测池中有气泡通过 * 可能原因 －梯度洗脱引起 －流动相脏 －柱子没平衡 －系统中污染物溢出 RID检测器温度不稳定 * 鬼峰－没有进样就有色谱峰出现 原因－流动相脏，尤其是水相 * 常见色谱故障－双峰 柱头塌陷或柱床运动 泵头过滤芯部分堵塞 组分共流出 可能原因 －柱子进口过滤芯被污染 Purge阀过滤芯被污染 色谱柱被污染 连接管路堵塞 进样器旋转密封阀被堵塞 进样针或者针座被堵塞 可用分段法来检查哪一段发生堵塞 * 溶剂进口过滤芯被堵 连接管路泄漏或其他备件泄漏 溶剂或流速的改变 主动阀失灵 四元比例阀失灵 单向出口阀失灵 柱子失效（固定相流失） * 可能原因 －溶剂进口过滤芯堵塞 －溶剂未脱气 －泵的密封圈老化 －出口单向阀失效 －主动阀失效 －最常见的原因失泵内有七宝 * 吸滤头 单向阀 柱塞密封圈 线路过滤器 进样器 检测器 吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时 单向阀－－定期清洗，压力波动大时 泵－－自动清洗 在线过滤器－压力大时清洗 材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗 吸滤头 故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗 单向阀 故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压力 偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清洗 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则堵塞。 线路过滤器 排液阀 压力传感器 线路过滤器 流动相 使用流动相尽量要清洁； 进液处的砂芯过滤头要经常清洗； 流动相交换时要防止沉淀； 避免泵内堵塞或有气泡； 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染； 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭； 单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流速 4.6 x 50 0.5 mL 5 min 4.6 x 30 0.3 mL 3 min 4.6 x 15 0.15 mL 1.5 min 4.6 x 150 1.54 mL 15 min 2.1 x 50 0.10 mL 5 min 60 sec 2.1 x 30 0.06 mL 3 min 36 sec 2.1 x 15 0.03 mL 1.5 min 18 sec 色谱柱 柱内 平衡时间 尺寸 体积 流速 (mm) (Vm) 1.0 mL/min 色谱柱 柱内 平衡时间 尺寸 体积 流速 (mm) (Vm) 0.2 mL/min 1.0mL/min 色谱柱清洗保存 反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在90%的甲醇溶液中。 分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮化钠水溶液中。 离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积，保存在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存在低盐的流动相中。 在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。 样品池要保养 * All HPLC detectors, regardless of design should provide the functions outlined here. * A prefect detector design would provide all of the listed features. Unfortunately, no such detector exists an