第 十 一 章 RNA的生物合成（转录P266）RNA Biosynthesis, Transcription电子教案.pptVIP

第 十 一 章;转录 (transcription) 以DNA为模板，以NTP为原料，在RNA聚合酶的作用下合成RNA的过程。;参与转录的物质;转录和复制的相同点;模板和酶 Templates and Enzymes;一、转录模板 ;5′···GCAGTACATGTC ···3′;5? 3?;不对称转录 (asymmetric transcription) 就某一确定活化基因的转录，只能以DNA双链的一条链作为模板，这种现象称为不对称转录。 ;（一）原核生物的RNA聚合酶 大肠杆菌（E.coli）RNA 聚合酶：4种亚基?、?、?’、?组成的五聚体蛋白质 ?2??’ ? ，分子量480 kD。; 核心酶（core enzyme） ： ?2??’ 能催化NTP按模板的指引合成RNA，在转录延长全过程中均起作用;（二）真核生物的RNA聚合酶 ;三、模板上酶的辨认、结合;起始部位： 指DNA分子上开始转录的作用位点，该位点有与转录生成新生RNA链的第一个核苷酸互补的碱基，该碱基的序号为+1。;结合部位： 是DNA分子上与RNA聚合酶的核心酶结合的部位，其长度为7bp，中心部位在–10bp处，碱基序列具有高度保守性，富含TATAAT序列，故称之为 TATA box (Pribnow box)。该序列中富含AT碱基，因此双链DNA易发生解链，有利于RNA聚合酶的结合。;RNA聚合酶保护法;转录过程 The Process of Transcription; 大肠杆菌转录过程包括转录起始、延长、终止三步。 真核生物的转录，除延长过程相似外，起始、终止 都与原核生物有较多的不同。;（一）转录起始;2. DNA双链解开;Finding and binding the promoter;（二）转录延长;Chain Elongation ;;RNA synthesis occurs in a “moving” transcription bubble on the DNA template;o;5?;（三）转录终止;3’;依赖Rho (ρ)因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止;Rho因子（ ρ 因子 ）： Rho因子是rho基因的产物，广泛存在于原核和真核细胞中，由6个亚基组成，分子量300KD。Rho因子结合在新生的RNA链上，由5’端向3’端的方向移动。 Rho因子有ATP酶的活性和解螺旋酶的活性;ρ因子 ;2. 非依赖 Rho因子的转录终止;2. 非依赖Rho的转录终止;5′pppG;二、真核生物的转录起始;真核生物编码基因两侧的DNA序列，可影响自身基因的表达活性，通常是非编码序列，包括启动子、增强子、沉默子;2. 转录因子 ;参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ ;3. 转录起始前复合物 (pre-initiation complex, PIC) ;POL-Ⅱ;（二）转录延长;RNA-Pol;5?------AAUAAA-;真核生物RNA的加工 Post-transcriptional Modification;几种主要的修饰方式;mRNA的转录后加工（真核生物） tRNA的转录后加工（自学） rRNA的转录后加工（自学）; hnRNA （hetero-nuclear RNA, hnRNA） 核内出现的转录初级产物，分子量往往比在胞浆内出现的成熟mRNA大几倍，甚至数十倍，核内的初级mRNA称为核内不均一RNA。;5’-末端：m7G-ppp5’-Np（帽） 蛋白质合成时：促进核蛋白体与mRNA的结合，加速翻译的起始速度 增强mRNA的稳定性，防止被核酸酶水解 3’-末端：polyA（尾） 参与mRNA从核内向胞质的转移 防止外切酶的水解，增强mRNA的稳定性 ;（三）mRNA的剪接;真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 ; mRNA的剪接 Splicing;;鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图;;? RNA编辑作用说明，基因的编码序列经过转录后加工，是可有多用途分化的，因此也称为分化加工(differential RNA processing)。;RNAaseP、内切酶;RNAaseP、内切酶;碱基修饰;三、rRNA的转录后加工;核酶能起催化作用的结构要求： ——槌头状结构 (hammerhead structure);核酶研究的意义;;;Asymmetric transcription Coding strand and template stran