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PAGE PAGE 7 医学微生物学与免疫学 实验指导 （供医疗、护理、口腔、药学等专业用） 主编：彭效祥 班级： 学号： 姓名： 山东万杰医专微免教研室编制 2007年6 目 录 实验项目一 细菌形态及结构观察…………………3 实验项目二 细菌形态学检查法……………………4 实验项目三 细菌的分布……………………………6 实验项目四 细菌的消毒及药敏试验………………7 实验项目五 血型抗原检测…………………………9 实验项目六 免疫球蛋白的测定……………………10 实验项目七 细菌凝集反应…………………………12 实验项目八 琼脂双扩散试验………………………13 实验一 细菌形态及结构观察 一、实验目的 1、熟悉显微镜油镜的使用方法，学生能独立用油镜观察细菌标本。 2、认识细菌的基本形态及特殊结构鞭毛、荚膜、芽胞等。 二、实验内容 1、显微镜油镜的使用方法及维护 2、细菌形态及结构观察 三、实验仪器、设备及材料 1、显微镜 2、标本（鞭毛、荚膜、芽胞、葡萄球菌、链球菌等） 四、实验原理 细菌较小，肉眼不能直接观察，通过显微镜放大1000倍后观察细菌的形态结构 五、实验步骤 1、显微镜油镜使用由指导教师讲解、演示、学生自己操作 2、细菌的基本形态观察—个人操作 个人使用油镜观察细菌中的球菌、杆菌、弧菌等形态标本片。 细菌的特殊结构观察—示教 认真观察示教标本——芽孢、荚膜及鞭毛形态。 六、实验报告要求 绘出观察到的细菌形态及结构图。 七、实验注意事项 1、显微镜的正确使用 2、避免压碎标本片和损坏镜头 八、思考练习 1、如何正确使用显微镜的油镜观察细菌 2、绘制出细菌常见的形态与结构 实验二 细菌形态学检查法 一、实验目的 1、熟悉细菌涂片的制作。 2、掌握革兰氏染色法。 二、实验内容 1、细菌涂片制作 2、革兰氏染色法 三、实验仪器、设备及材料 1、菌种（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）、取菌环、玻璃片、生理盐水、酒精灯 2、搪瓷盆、支架、冲洗瓶、染液（结晶紫或龙胆紫、碘液、95%酒精、稀释复红） 四、实验原理 1、G+菌细胞壁结构较致密, 含脂类少,乙醇不易透入, 95%乙醇可使细胞壁脱水,细胞间隙缩小,通透性下降,阻碍结晶紫和碘的复合物渗出;而G-菌的细胞壁结构较疏松, 含脂类量多.易被乙醇溶解, 致使细胞壁通透性增高, 细胞内的结晶紫和碘的复合物易被溶出而脱色. 2、G+菌含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不易被脱色，G-菌含核糖核酸镁盐少，易被脱色。 3、G+菌等电点（PH2-3）比G-菌等电点（PH4-5）低，在同一PH染色环境中，G+菌比G-菌带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易脱色。 五、实验步骤 1、细菌涂片制作—个人操作 （1）、取洁净载玻片一张，于中心滴加生理盐水一小滴 （2）、用铂金耳以无菌手续取菌少许，涂于生理盐水中，使成1cm2左右微混浊菌液，待干。 （3）、将涂片通过火焰三次，固定菌膜即成。 2、染色 （1）、初染 加结晶紫染液于涂片上,染一分钟后,用水洗去染液. （2）、媒染 加碘液染一分钟,水洗. （3）、脱色 加95%乙醇,不时摇动30秒,至无紫色脱落为止,水洗. （4）、复染 加稀释石炭酸复红液一分钟,水洗,干后镜检. 六、实验报告要求 记录涂片及染色过程及观察结果。 七、实验注意事项 （1）、染色结果常受操作者技术影响,尤其是容易过度脱色,往往阳性染成阴性. （2）、在同一载玻片上,需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作革兰阳性及阴性对照. （3）、染色关键在于涂片与脱色,涂片不宜过厚,固定不宜过热,脱色不宜过度. （4）、菌龄为18～24小时为佳. 八、思考练习 1、涂片的制作方法及革兰氏染色法的步骤 2、革兰氏染色法的意义 实验三 细菌的分布 一、实验目的 1、了解细菌在自然界及正常人体皮肤上的分布情况，树立无菌观念。 2、熟悉细菌的培养方法 二、实验内容 1、细菌在自然界的分布：空气、水、土壤中细菌的培养。 2、正常人皮肤细菌培养。 三、实验仪器、设备及材料 普通固体培养基、取菌环、试管、吸管、恒温培养箱 四、实验原理 培养基、恒温箱为细菌提供合适的生长繁殖