《第四课哺乳动物总RNA提取及电泳》-精选课件(公开).pptVIP

第四课 哺乳动物总RNA提取及 RNA琼脂糖凝胶电泳 实验原理 异硫氰酸胍可将哺乳动物组织匀浆中蛋白质变性，十二烷基肌氨酸钠可使细胞裂解，并释放RNA，同时保持RAN的完整。苯酚也是蛋白质变性剂，加入氯仿后离心，溶液分为水相和有机相。酸性条件下DNA同蛋白质一起变性被离心下来，绝大部分RNA则保留于水相。水相的RNA可经异丙醇沉淀。 实验试剂 裂解液（4M异硫氰酸胍，25mM柠檬酸钠 Ph7.0，0.1Mβ-巯基乙醇，0.5%十二烷基肌氨酸钠） 2M醋酸纳，pH4.0 水饱和苯酚，pH5.0 氯仿 75%乙醇（用DEPC处理的去离子水配置） DEPC处理的去离子水 实验步骤 取3克组织，加30ml裂解液，匀浆。 吸取500ul匀浆液于1.5ml微量离心管中. 加50ul2M醋酸纳（pH4.0），500ul水饱和苯酚，100ul氯仿，震荡1分钟。 冰上放置15分钟。 13000rpm，4℃，5分钟。 将上清转移至1.5ml无酶微量离心管中，加等体积的苯酚/氯仿（1:1），震荡1分钟。 13000rpm，4℃，5分钟。 将上清转移至1.5ml无酶微量离心管中，加等体积的氯仿，震荡1分钟。 13000rpm，4℃，5分钟。 将上清转移至1.5ml无酶微量离心管中，加等体积的异丙醇。 0℃放置20分钟。 13000rpm，4℃，10分钟。 去上清。 用1ml75%乙醇洗管壁。 尽量去处乙醇