双波长薄层色谱扫描法测定甲基红含量.pptVIP

学习利用岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪测定甲基红含量的原理与方法，初步了解 CS-930 型薄层色谱扫描仪的结构与使用。 用于定量的薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪或薄层色谱光密度计，用此种仪器对薄层上被分离的物质进行直接定量分析的方法称为薄层色谱扫描法。其分析的基本原理是用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上，对整个斑点进行扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量分析的目的。 本实验根据试样中甲基红、甲基橙、甲基黄有不同的极性，在硅胶板上用混合展开剂展开，可将它们分开。然后采用岛津 CS-930 型双波长薄层色谱扫描仪，可直接在薄层板上对甲基红斑点进行定量分析。 1. 解释甲基红、甲基橙及甲基黄在硅胶板上以正丁醇、无水乙醇和环己烷混合物为展开剂时，各组份的位置，并说明各Rf 值不同的原因。 2. 本实验的误差来源主要在哪里？实验过程应注意哪些？ * * 双波长薄层色谱扫描法测定甲基红含量 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器与试剂 仪器： 岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪具有多功能、自动化程度较高的特点，它包括主机及 DR-2 数据处理机两部分。CS-930型薄层色谱扫描仪与常见光密度法仪器不同之处在于它具有双波长、锯齿扫描、校正曲线线性化器和背景校正的功能。 （1）双波长法：试样斑点最大吸收波长定为样品波长λ1 ，试样斑点不吸收的波长定为参考波长λ2 。选用双波长法可以提高灵敏度、平滑基线和增强校正曲线的线性。 （2）锯齿扫描法：用以消除因斑点形状不规则、大小不等以及浓度分布不均匀带来的测量误差。 （3）校正曲线线性化：校正曲线线性化器校正光束被薄层板上的吸附剂所分散，致使测定的吸光度不与物质含量成正比偏离线性的影响。 （4）背景补偿：补偿背景吸收光的影响。 试剂： 甲基红 分析纯 0.1%（60% 乙醇溶液） 甲基橙 指示剂规格 0.06%（水溶液） 甲基黄 指示剂规格 0.06%（95% 乙醇溶液） 试 样 内含甲基红0.1%，甲基橙 0.06% 和甲基黄0.06% 无水乙醇 分析纯 展开剂 无水正丁醇﹕无水乙醇﹕无水环己烷 = 3﹕1﹕4 四、实验步骤 （1）点样：取一块硅胶板（10 × 20 cm），用定量毛细管吸取甲基红、甲基橙、甲基黄及试样各 1 μL，分别点在硅胶板上，点样间距为 1 ~ 1.5 cm。 （2）展开：将点好的薄层板放置在密闭的展开槽中，用展开剂进行展开（一般需 30 min左右），斑点间隔 2 cm左右即可。然后取出薄层板将展开剂挥发至干。 （3）测量： A. 将薄层板固定于平台，接通电源开启主机，主机系统自检后进入 CS-930 型薄层色谱扫描仪分析系统。 B. 对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收光谱选择最大吸收峰波长作为λ1；选择斑点吸收光谱的基线部分，既该化合物无吸收处的波长为样品的参考波长λ2。 C. 选择测试分析参数。 D. 确定光斑起始位置，进行色谱扫描。 E. 对色谱峰进行查找编辑。 F. 做工作曲线。 G. 执行定量，测得试样中甲基红的含量。 H. 确定要输出的内容与格式，打印分析实验报告。 五、思考题 *