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第四节 酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 酶催化的生物化学反应，称为酶促反应（enzymatic reaction）。 在酶的催化下发生化学变化的物质，称为底物（substrate）。 酶促反应动力学的概念 研究各种因素对酶促反应速度的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 底物浓度对反应速度的影响 单底物、单产物反应 E + S → E + P 底物浓度远远大于酶浓度 1、 酶反应速度的测量 酶反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示，反应速度的单位是: 浓度／单位时间。 v=d[P]/dt= -?d[S]/dt 研究酶反应速度应以酶促反应的初速度为准。 2、底物浓度对酶促反应速度的影响 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到一定值，几乎所有的酶都与底物结合后，反应速度达到最大值（Vmax），此时再增加底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。说明酶己被底物所饱和(saturation)。 所有的酶都有此饱和现象。 Km是酶的特征常数之一。 一般只与酶的性质、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。 不同条件下具有不同的Km值 ? 米氏常数Km的意义 (1)Km是一种酶的重要特征物理常数，可以通过Km值来鉴别酶的种类。 （2）可以用来判断酶的最适底物 Km值随不同底物而异的现象可以帮助判断酶的专一性，并有助于研究酶的活性中心。 米氏常数Km的意义 （3） 1/Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 最适底物与酶的亲和力最大. 米氏常数Km的意义 （4）可以确定一条代谢途径中的限速步骤和关键酶 代谢途径是指由一系列彼此密切相关的生化反应组成的代谢过程，前面一步反应的产物正好是后面一步反应的底物，例如，TCA途径。 限速步骤就是一条代谢途径中反应最慢的那一步，Km值最大的那一步反应就是，该酶也叫这条途径的关键酶。 二、酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速度与酶浓度成正比。 关系式为：V = K3 [E] * ※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 1902 Brown [sucrose] V sucrose + H2O glucose + fructose 果糖糖苷酶 一、底物浓度对反应速度的影响 研究前提 零级 一级 混合级 3、米氏方程： 1913年Michaelis和Menten基于中间产物学说，提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) ? ★米式常数的涵义 当反应速度v=1/2 Vmax时， Km = [S]， Km的物理意义是：当反应速度达到最大反应速度一半时底物的浓度。 单位：mol·L-1 （1）. Km的物理意义 Vmax V [S] Km Vmax/2 （2）?Km与天然底物 Km最小的底物称该酶的最适底物或天然底物。因为： Km愈小（达到Vmax一半所需的底物浓度愈小）表示V对[S] 越灵敏。 （ V [S] 1/2Vmax Km （3）.Km与底物亲和力 Km是ES分解速度（K2+K3）与形成速度（K1）的比值，它包含ES解离趋势（K2／K1）和产物形成趋势（K3／K1）。 ★Km能近似地表示酶与底物亲和力的大小。 基本原则：将米氏方程变化成相当于y=ax+b的直线方程，再用作图法求出Km。 例：双倒数作图法（Lineweaver-Burk法） 林-贝氏方程 （七）??★Km和Vmax的求解方法 酶动力学的双倒数图线 0 V [E] 当[S][E]时，Vmax = k3 [E] 酶浓度对反应速度的影响 三、pH对酶促反应速度的影响 1. pH影响酶活力的因素 影响酶蛋白构象，过酸过碱导致酶蛋白变性 影响底物分子解离状态 影响酶分子解离状态 影响酶的活性中心构象 三、pH对酶促反应速度的影响 1. pH影响酶活力的因素： 极度pH的条件引起酶蛋白的变性。 pH影响底物的解离，从而影响酶与底物的结合。 pH影响酶分子解