谷丙转氨酶医学生,生化学习-精选课件(公开).pptVIP

谷丙转氨酶 谷丙转氨酶 ALT在肝细胞中含量较多，且主要存在于肝细胞的可溶性部分。当肝脏受损时，此酶可释放入血，致血中该酶活性浓度增加。 肝细胞损伤的灵敏指标，急性病毒性肝炎ALT阳性率为80%-100%。肝炎恢复期，ALT转入正常。但如果在100IU左右波动或再度上升，为慢性活动性肝炎。 谷丙转氨酶 重症肝炎或亚急性肝坏死时，再度上升的ALT在症状恶化的同时，酶活性反而降低，表明肝细胞增生不良，预后不佳。因此，ALT可以观察病情的发展，并作预后判断。 慢性活动性肝炎或脂肪肝，ALT轻度增高（100-200IU/L），或属正常范围，且AST大于ALT。肝硬化、肝癌时，ALT有轻度或中度增高，提示可能并发肝细胞坏死，预后严重。 谷丙转氨酶 其它原因引起的肝脏损害，如心功能不全时，肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死，可使ALT、AST明显升高，某些化学药物如异菸肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷剂等可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的升高。 连续监测法测定ALT L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH+ LD 乳酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶的活力。 在ALT双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本计算ALT的活性浓度。 连续监测法测定ALT ALT测定中存在二个副反应 血清中存在的α-酮酸（如丙酮酸）能消耗NADH。 血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH）增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。 上述副反应都能消耗NADH，使测定结果偏高。但在双试剂法，因温育期长，能有效消除干扰反应。 赖氏法测定ALT L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+2，4二硝基苯肼在碱性条件下2，4二硝基苯腙（红棕色，波长505nm) 赖氏法测定ALT评价 重复性差 由于限制底物α-酮戊二酸 的用量，如一般采用2.0mmol/L的浓度下，反应速度只有最大速度的65%，使产物的生成量与酶的活性之间不能呈现良好的线性关系。 2，4二硝基苯肼在碱性条件下也能显色，为了降低试剂空白的吸光度不得不使用低浓度的2，4二硝基苯肼（1.0mmol/L），这种水平2，4二硝基苯肼仅能与反应体系中的两种酮酸的一半反应。低浓度的2，4二硝基苯肼使标准曲线呈非线性。 赖氏法测定ALT评价 产物旁路效应，即ALT催化生成的产物丙酮酸，在乳酸脱氢酶催化下被消耗掉，从而影响测定结果。 准确性差 由于线性范围狭窄，测定温度为37℃时标准曲线只能延长到150卡门单位，但临床病人多见200单位以上。尽管采用标本稀释后再测定，但偏差大。影响因素较多，误差较大。 连续监测法评价 准确性好 由于测定上限在酶促反应的线性范围内，偏差小。 精确性好 测定条件较赖氏法易于控制，CV值比赖氏法小。 操作简便 标本测定中不需要标准对照，测定结果计算方便。 门冬氨酸氨基转移酶 AST在心肌细胞内含量较多，心肌梗死病人发病时，血清中AST活性增高，在发病后6-12h之内显著增高，在16-48h达到高峰，约在3-5d恢复正常。血清中的AST也可来源于肝细胞，各种肝病病人也可引起AST的增高，有时可达1200卡门单位，中毒性肝炎病人还可更高。肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起AST的轻度增高。 连续监测法测定AST L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+ MOH L-苹果酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶的活力。 在AST双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本计算ALT的活性浓度。 连续监测法测定AST 连续监测法测定AST的误差可来自内源性和外源性，内源性干扰主要来源于血清中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）。外源性干扰来自于试剂中污染的GLDH和AST。内源性丙酮酸的干扰通过加入高活性的LDH在温育期间将其迅速转变为乳酸而消除。血清中的GLDH能催化α-酮戊二酸 和NH3生成谷氨酸，同时使NADH氧化为NAD+，可使结果假性增高。 赖氏法测定AST 门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸，反应60分钟。 α-丙酮酸+2，4二硝基苯肼在碱性条件下2，4二硝基苯腙（红棕色，波长