《酶的非水相催化》-精选课件(公开).pptVIP

Chapter 5 Enzymatic catalysis in Non-aqueous system 第五章 酶的非水相催化 Contents 7.1 酶催化反应的介质 酶非水相催化的几种类型 7.2 有机介质反应体系 （1） 单相共溶剂体系（水/水溶性有机溶剂） （２） 两相体系（水/水不溶性有机溶剂） （３）（正）胶束体系 （4） 反胶束体系 （5） 微水介质体系（有机溶剂体系）☆ （1）与水溶性有机溶剂组成的均一体系 这种均一体系是由水和极性较大的有机溶剂互相混溶组成的反应体系。（亲脂性底物） 酶和底物都是以溶解状态存在于均一体系中。不存在传质阻碍，但由于极性大的有机溶剂对一般酶的催化活性影响较大，所以能在该反应体系的进行催化反应的酶较少。 （2）两相体系 这种体系是由水和疏水性较强的有机溶剂组成的两相或多相反应体系。游离酶、亲水性底物或产物溶解于水相，疏水性底物或产物溶解于有机溶剂相。 催化反应通常在两相的界面进行。一般适用于底物和产物两者或其中一种是属于疏水化合物的催化反应。 如果采用固定化酶，则以悬浮形式存在两相的界面。 两相体系将头孢立新得率提高3倍 （3）（正）胶束体系 胶束又称为正胶束或正胶团，是在大量水溶液中含有少量与水不相混溶的有机溶剂，加入表面活性剂后形成的水包油的微小液滴。 表面活性剂的极性端朝外，非极性端朝内，有机溶剂包在液滴内部。 反应时，酶在胶束外面的水溶液中，疏水性的底物或产物在胶束内部。反应在胶束的两相界面中进行。 （4）反胶束体系 含有表面活性剂与少量水的有机溶剂系统。 反向微团：疏水尾部向外，与非极性的有机溶剂接触；极性头部向内，形成一个极性核。 反应时，酶分子在反胶束内部的水溶液中，疏水性底物或产物在反胶束外部，催化反应在两相的界面中进行。 （5）微水介质体系 微水介质体系（microaqueous media）是由有机溶剂和微量的水组成的反应体系，是在有机介质酶催化中广泛应用的一种反应体系。 通常所说的有机介质反应体系主要是指微水介质体系。 微量的水主要是酶分子的结合水，它对维持酶分子的空间构象和催化活性至关重要。另外有一部分水分配在有机溶剂中。 有机介质酶催化的优点 1． 有利于疏水性底物的反应。 2． 能催化在水中不能进行的反应 3． 可改变反应平衡移动方向 4． 可控制底物专一性 5． 可防止由水引起的副反应。 6． 酶易于实现固定化。 7． 酶和产物易于回收。 8．可提高酶的热稳定性，可避免微生物污染。 7.3 有机介质中酶催化反应的条件及控制 酶在有机介质中可以催化多种反应，主要包括：合成反应、转移反应、醇解反应、氨解反应、异构反应、氧化还原反应、裂合反应等。 酶在有机介质中的各种催化反应受到各种因素的影响：酶的种类和浓度、底物的种类和浓度、有机溶剂的种类，水含量、温度、pH和离子强度等。 主要应控制的条件有： 水含量 有机溶剂 酶的种类和浓度 底物的种类和浓度 温度 pH值 离子强度 （1）水含量 水分子通过氢键、疏水作用、范德华力等作用来维持酶分子催化活力所需要的构象。 绝对无水的条件下，酶没有催化活性。 干燥的酶水合过程： （1） 与酶分子表面带电基团结合达到0-0.07g/g（水/酶） （2） 与表面的极性基团结合(0.07-0.25g/g) （3） 凝聚到表面相互作用较弱的部位（0.25~0.38g/g） （4） 酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖。（0.38g/g） 必需水 必需水维持酶的催化活性； 无水条件下，酶分子表面的带电基团和极性基团会因相互作用而形成“锁定”的失活构象，即：有机溶剂的低介电常数往往会导致蛋白质带电基团之间更强的静电作用，使酶的“刚性”更强； 含水量过低时，酶构象过于“刚性”而影响或失去催化活性； 含水量过高，酶结构的柔韧性过大，会引起酶结构改变而失活。 酶活最大时——蛋白质结构的动力学刚性和热力学稳定性（柔性）之间达到最佳平衡点。 刚性：生物大分子结构的精确性 柔性：生物大分子局部区域具有一定的可运动性。 微水介质体系中的含水量 在有机介质中含有的水，主要有两类，一类是与酶分子紧密结合的结合水，另一类是溶解在有机溶剂中的游离水。 最佳含水量 通常在有机溶剂中对于酶的催化活性存在一最佳含水量。 胰脂肪酶活性与含水量的关系 （2）有机溶剂的选择 有机溶剂选择要适当，其主要是通过对体系中水、酶及底物和产物的作用直接或间接地影响到酶活性。 酶在低极性溶剂中具有较高的活性和稳定性。 有机溶剂极性的强弱可以用疏水参数lgP表示。 P是指溶剂在正辛烷与水两相中的分配系数。疏水参数越大，表明其疏水性越强；反之疏水参数越小，则极性越强。 有机溶剂的选择： 有机溶剂的极性