04-第三章-微生物的形态和构造-食品微生物学-江南大学.ppt

大肠杆菌T系列噬菌体侵入过程 尾部吸附到敏感菌的表面后，将尾丝展开，通过尾部的刺突固着在细胞上 尾部释放的酶水解细胞壁的肽聚糖，使菌壁产生一小孔 尾鞘收缩，将尾髓压入细胞。头部的DNA通过尾髓这一空管注入细菌细胞内，而蛋白质外壳留在胞外 自外裂解现象：大量噬菌体侵入同一细胞，将使细胞壁产生许多小孔，在尚未进行噬菌体增殖时就可能引起细胞立即裂解 T4噬菌体的吸附和侵入过程 轮状病毒的入侵 三、复制(replication) 病毒核酸物质及蛋白质在寄主细胞内的合成 病毒借助宿主细胞提供的原料、能量和场所合成核酸和蛋白质，期间所需的多数酶也来自宿主细胞。 在病毒进入宿主细胞后生物合成阶段，胞浆中无病毒颗粒，称为隐蔽期（eclipse）。 病毒核酸的复制 双链DNA的复制: (±)DNA→ (±)DNA 单链DNA的复制: +DNA → -DNA → ±DNA → +DNA 双链RNA的复制: ±RNA →+RNA →-RNA →± RNA +RNA复制: +RNA →-RNA →± RNA →+RNA -RNA复制: -RNA → +RNA(mRNA) →Pr(RNA复制酶) 逆转录病毒单链RNA的复制: +RNA → (-)DNA → (±) DNA →+RNA肿瘤病毒 病毒核酸的复制 左图：病毒核酸链接 入寄主核酸链 右图：病毒核酸复制 增殖过程中基因表达特点 基因表达有先有后 基因表达的顺序为:早期表达;次早期表达;核酸复制;晚期表达 前一次表达产物是后一次表达的mRNA 聚合酶 晚期表达的结果是合成了各种装配蛋白(另外还有溶菌酶) 四、装配（Assembly）与成熟（Maturity) 装配：增殖期合成的噬菌体的核酸和蛋白质按一定的顺序装配成噬菌体颗粒 病毒合成的位置 大多数DNA病毒，在核内复制DNA，在胞浆内合成蛋白质，转入核内装配成熟。而痘苗病毒其全部成份及装配均在胞浆内完成。 RNA病毒多在胞浆内复制核酸及合成蛋白。 无包膜病毒组装成核衣壳即为成熟的病毒体，病毒的早期蛋白，即非病毒结构成分不组装入病毒，残留在感染细胞中。 五、释放(Release) 从细胞内转移到细胞外的过程为释放。 病毒装配成熟后释放的方式有： （1）宿主细胞裂解，病毒释放到周围环境中，见于无包膜病毒， 绝大多数无包膜病毒释放时被感染的 细胞崩解，释放出病毒颗粒，宿主细 胞膜破坏，细胞迅即死亡。如腺病毒、 脊髓灰质炎病毒等； 病毒粒子的释放 （2）以出芽的方式释放，见于有包膜病毒， 如疱疹病毒在核膜上获得囊膜， 流感病毒在细胞膜上获得囊膜而成熟，然后以出芽方式释放出成熟病毒。　　 　 8-3 噬菌体的类型 根据噬菌体所经历的繁殖过程可将噬菌体分为两种： 1.烈性噬菌体(virulent phage) ：凡在短时间内能连续完成吸附、侵入、复制、装配和裂解这五个阶段而实现其繁殖的噬菌体。 2.温和性噬菌体(temperate phage) ：凡在吸附并侵入细胞后，噬菌体的DNA只整合在宿主的核染色体组上并可长期随宿主DNA的复制而进行同步复制，一般部进行增殖和引起宿主细胞裂解的噬菌体。又称溶源性噬菌体。 烈性噬菌体与温和性噬菌体生活史的比较 烈性噬菌体的生活史 温和性噬菌体的生活史 8-4噬菌体效价的测定 噬菌体的效价：指每毫升试样中所含有的侵染性的噬菌体的粒子数。 测定方法： 液体稀释管法 斑点试验法：半定量，结果不准确 双层平板法：精确测定，普遍采用底层平板为2%左右的琼脂培养基7~8ml 上层平板包括上层培养基（~1%琼脂培养基3ml）宿主菌悬液、噬菌体试样 单层平板法：方法简单，但效果较差 玻片快速法：快速但精确度较差 测定噬菌体生长的方法 高浓度敏感细菌 ＋ 适量噬菌体 除去游离噬菌体 进行高倍稀释 培养 定时取样测定噬菌体数 混合一定时间 (5min) 8-5一步生长曲线（one-step growth curve） ——定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线 1939年，Max Delbruck Emory Ellis： 该实验标志着分子病毒学、分子生物学和分子遗传学的建立Max Delbruck因此荣获1969年Nobel Prize 一步生长曲线是研究病毒复制的一个经典试验，最初是为研究噬菌体的复制而建立，以后推广到动物病毒和植物病毒的复制研究中。 一步生长曲线（one-step growth curve）  1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数