3D水凝胶压应力模型建立及压应力对成骨细胞的影响.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（８）：８１４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ ３Ｄ水凝胶压应力模型建立及压应力 对成骨细胞的影响 张玲莉　仝晓阳　郭健民　雷　乐　邹　军 （上海体育学院　上海　２００４３８） 摘要　目的：通过建立３Ｄ水凝胶细胞模型，采用不同强度、频率、时间对ＭＣ３Ｔ３Ｅ１细胞进行机械 加压干预，进而探讨促进成骨细胞生长的适宜压应力方案。方法：设计不同强度、频率、时间的压 应力梯度方案对成骨细胞 ＭＣ３Ｔ３Ｅ１进行干预。加压干预结束后即刻收集细胞，对样本中的 ＡＴＦ４、ＡＬＰ、Ｒｕｎｘ２、Ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ、ＲＡＮＫＬ和ＲＡＮＫｍＲＮＡ进行定量检测。结果：经统计学分析后发现 不同强度和频率对ＡＬＰ（Ｐ＜０．０５）、Ｒｕｎｘ２（Ｐ＜０．０１）交互作用显著。此外，４ｈ加压Ｒｕｎｘ２的表达 量比１２ｈ加压的高（Ｐ＜０．０５）；４ｈ加压ＲＡＮＫＬ的表达量比１２ｈ加压的低（Ｐ＜０．０５）。结论：确定 了压力强度和频率后，对３Ｄ细胞水凝胶模型施加一段时间的压应力发现，以１％强度、０．５Ｈｚ频 率、４ｈ的压应力干预方案能够促进成骨细胞系的生长。 关键词　压应力　强度　频率　时间　成骨细胞系 中图分类号　Ｑ８１９ 　　骨骼内稳态受多个因素的影响，特别是机械载荷 规格的培养皿中复苏后采用 ＭＥＭ培养液（含 １０％ α ［１］ 和生长因子信号通路影响颇多 。系统研究细胞对力 ＦＢＳ＋１％ＰＳ），在３７℃、５％ＣＯ 的培养箱中进行常规细 ２ 学刺激信号的转导和响应主要是建立于体外特定力学 胞培养。每２天换一次液，细胞长至７０％ ～８０％融合 ［２］ 传导装置下细胞培养的基础上的 ，可以将机械载荷 时进行传代。 ［３］ 转化为细胞内生化反应 。 １．２　３Ｄ细胞水凝胶建模 　　目前机械牵张力作用于细胞的研究较多，而压力 　　１０ｃｍ规格的培养皿中细胞量达到９０％左右进行 作用于细胞的研究较少，主要是由于细胞压应力模型 干预，将细胞用胰酶消化后转移至 １５ｍｌ离心管中， 的建立尚不成熟，同时不同强度、频率、时间的压应力 １０００ＲＰ５ｍｉｎ离心后弃上清留沉淀，１０％的无菌蔗糖 对成骨细胞的影响也不同。因此，本研究在之前压应 溶液清洗两遍，加入 １００ｌ的无菌蔗糖溶液进行重悬， μ 力细胞模型的基础上，尝试建立３Ｄ水凝胶细胞模型， ７ 此时细胞计数浓度可以达到１～２×１０ｃｅｌｌｓ／ｍｌ。一般 同时采用不同强度、频率、时间压应力对 ＭＣ３Ｔ３Ｅ１细 建议细胞浓度在这个范围内，否则细胞量过低，在与水 胞进行机械干预，观察压应力对成骨细胞分化的影响， 凝胶混合后极易溶解在培养液中。 探讨促进成骨细胞分化的适宜压应力方案。 ＴＭ