大肠杆菌耐喹诺酮类机制分子生物学基础的初步研究.pptVIP

大肠杆菌耐喹诺酮类机制分子生物学基础的初步研究 深圳南山人民医院传染科（518052） 邓启文 引言 随着氟喹诺酮类药物在临床的广泛应用，其耐药菌株日益增多。氟喹诺酮类的作用的靶位是细菌的DNA回旋酶。为了了解大肠杆菌对其耐药的分子生物学机制，我们对6株耐药菌1株敏感菌和1株标准株（ATCC25922）的gyrA基因的N末端编码区进行了PCR-SSCP及序列测定分析以检测gyrA基因突变。 材料和方法（1） 菌株的收集 4株大肠杆菌耐药菌株及1株敏感株来自我院院感科及检验科，其中3株来自尿液标本2株粪便培养标本。均经过常规生化及血清学鉴定。大肠杆菌标准株ATCC-25922购自中国药品生物制品检定所。 材料和方法（2） 药敏试验 诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星药敏纸片购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所。药敏试验采用Kirby-Bauer法，结果按NCCLS1993年版标准制定。 材料和方法（3） 主要试剂 扩增DNAgyrA两条外引物为：5’-GAGGAA GAGCTGAAGAGCT CCT-3’及5’CCGGTAC GGTACGGTACGGTAAGCTTCTTCAA-3’分别位于gyrA40—61位碱基及686—707位碱基，两条内引物为5’-TCCGTCGCCTACTTT ACGCC-3’及5’-TCGGCGAAATCGACCG TC-3’分别位于gyrA1