农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴转化方法的比较及优化 - 段莹莹 .docVIP

第29卷 第4期2010年 8月 大豆科学SOYBEAN SC I E NCE Vo.l 29 N o .4Aug . 2010 农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴转化方法的比较及优化 段莹莹,赵 琳,陈李淼,李文滨 (东北农业大学大豆研究所,教育部大豆生物学重点实验室,黑龙江哈尔滨150030 收稿日期:2010 03 09 基金项目:转基因生物新品种培育科技重大专项资助项目(2008ZX08004 005、2009ZX08009 089B ;哈尔滨市科技创新人才研究专项资助 项目(RC2008QN002017;东北农业大学博士启动基金资助项目;大豆生物学省部共建教育部重点实验室开放基金资助项目(SB08A04;黑龙江省教育厅科学技术研究资助项目 第一作者简介:段莹莹(1985 ,女,在读硕士,现主要从事大豆转基因方面的研究。通讯作者:李文滨,教授,博士生导师。E m ai :l w enb i n l@i yahoo .co m 。 摘 要:以东农50、东农42和黑农44的子叶节和下胚轴为外植体,对农杆菌介导的大豆子叶节和下胚轴2种转化方法进行了比较和优化。结果表明:不同转化方法对大豆的品种要求不同,东农50适合子叶节转化法,而黑农44适合下胚轴转化法。在子叶节转化体系中,卡那霉素的筛选浓度是100mg L -1,在下胚轴转化体系中,卡那霉素的筛选浓度是75m g L -1,可见下胚轴体系比子叶节体系在卡那霉素筛选过程中表现得更为敏感。在子叶节和下胚轴转化体系中,最适乙酰丁香酮浓度均为200m o l L -1,最适共培养时间均为3d 。在子叶节转化体系中,5d 苗龄时转化率最高,而下胚轴转化体系中,4~6d 苗龄时转化率均较高,以6d 苗龄最高。关键词:大豆;子叶节转化;下胚轴转化 中图分类号:S565.1 文献标识码:A 文章编号:1000 9841(201004 0590 04 Co mparison and Opti m ization of the Agrobacteri u m m ediated T ransfor m ation of Soybean by U si ng Cotyledonary Node and Hypocotyl Explants DUAN Y i n g y i n g ,Z HAO L i n ,C H E N Li m iao ,LIW en bin (Soyb ean Research Ins tit u te ,Nort heast Agri cu lt u ralUn i vers i ty ,K ey Laborat ory of Nati onalE du cationalDepart m en t ,H arb i n 150030,H eil ong ji ang ,C h i na Abstrac t :Soybean co t y ledona ry node and hypocoty l transfor m ati on m ethods we re co m pa red and opti m ized us i ng t hree soybean genotypes ,D ongnong 50,D ongnong 42and H e i nong 44.T he results show ed tha t d ifferen t transfor m ati on m ethods required d ifferent soybean varieties .D ongnong 50w as suitable to coty ledonary node transfor m ati on m ethod ,wh ile H e i nong 44w as suitable to hypocoty l transfor m ation m ethod .In the coty ledonary node transfor m ati on syste m,the screeni ng concentra tion of K ana m ycin w as 100m g L -1,wh ile i n the hypo co tyl transfor m ation syste m w as 75m g L -1,the hypoco tyl transfor m ation syste m was m ore sensiti ve t han the co t y ledona ry node transfor m ation sy stem to kanamy ci n .T he opti m a l concentration of