几种真菌多糖硫酸酯化修饰前后理化性质的比较研究.docVIP

第25卷第1期分子科学学报V ol.25N o.1 2009年2月JOURNA L　OF　M O LEC U LAR　SCIE NCE February2009 [文章编号]100029035(20090120055205 几种真菌多糖硫酸酯化修饰 前后理化性质的比较研究 王月秋1,张　昕2,魏　民3,张景海1,张丽萍3,3 (1.沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016; 2.吉林大学生物与农业工程学院,吉林长春130022; 3.东北师范大学生命科学学院,吉林长春130024 [摘　要]　制备了平菇等5种真菌类硫酸酯化多糖,离子色谱法测得其含硫量为12%~15%,取代度为1.02~1.46.对其硫酸酯化修饰前后的柱层析行为、电泳行为、红外光谱、圆二色谱、比旋光度、特性黏度进行了系统的比较研究.结果表明,引入硫酸基后,多糖的相对分子质量增大,电泳迁移率增加,红外光谱和圆二色谱出现特征吸收峰,比旋光度发生显著变化,特性黏度明显降低,表明硫酸酯化修饰后多糖的构象发生了显著变化,可能形成了特定的部分有序结构. [关键词]　真菌多糖;硫酸化;圆二色谱;比旋光度;特性黏度 [中图分类号]　O630　　　[学科代码]　150?45　　　[文献标识码]　A 0　引言 硫酸酯化多糖由于具有抗凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等诸多独特的作用[129],受到人们的广泛重视.尤其是硫酸酯化多糖抗HI V活性的发现[10212],使硫酸酯化多糖的研究成为当今多糖研究中又一个“兴奋点”.香菇多糖、地衣多糖、木聚糖、牛膝多糖等原来不具有抗病毒活性的多糖,经硫酸酯化修饰后都显示出抗病毒活性[8,13].金顶侧耳多糖、箬叶多糖等本身具有抗病毒活性的多糖,经硫酸酯化修饰后,其抗病毒活性显著提高[14215].多糖的活性与其初级结构和三维空间构象密切相关,为了深入了解硫酸酯化多糖的构效关系,本文制备了平菇(ATS、红缘层孔菌(FPS、金顶侧耳(PCS、紫花脸(TPS、安络小皮伞(MAS5种硫酸酯化真菌多糖,并对其修饰前后的理化性质及抗病毒活性进行了较系统的比较研究,以期为抗病毒药物的筛选及抗病毒机制的研究提供重要依据.除PCS[16]外,国内外未见其余4种硫酸酯化真菌多糖的研究报道. 1　实验材料 平菇(Agaricus tabulariis Peck、红缘层孔菌(Fomes pinicola VO.Cke、金顶侧耳(Pleurotus citrinopilcatus Quél、紫花脸(Tricholoma per sonatum、安络小皮伞(Marasmius androsaceus(L.Ex.Fr.这5种真菌的水溶收稿日期:2008209206 基金项目:国家自然科学基金资助项目 联系人简介:张丽萍(19452,女,教授,博士生导师,主要从事多糖结构与功能关系研究. E2m ail:zhanglp625@nenu.edu.cn 65分子科学学报第25卷性多糖,均为Sepharose C L24B柱层析单一峰糖样. 2　实验方法 2.1　硫酸酯化多糖的制备 采用氯磺酸2吡啶法[13]进行硫酸酯化修饰,所用试剂均为国产分析纯试剂.将附有冷凝管和滴液漏斗的三角瓶置盐水2冰浴中,加入吡啶,磁力搅拌使之充分冷却,用滴液漏斗慢慢加入氯磺酸.30~40min 滴加完毕,然后加入多糖粉末,磁力搅拌加热至100℃,恒温反应60min.冷至室温,向反应液中加入适量冰水,中和后加入乙醇,离心收集沉淀,将沉淀溶于水,蒸馏水透析72h,过滤.滤液经浓缩、醇沉、常规干燥,得硫酸酯化多糖. 2.2　硫酸基含量的测定 采用离子色谱法.色谱条件:美国戴安公司生产的DX2300型离子色谱仪,AS4A2SC阴离子色谱柱.流动相为1.7mm ol/L碳酸氢钠和1.8mm ol/L的碳酸钠溶液,流速为2m L/min.检测器为C DM2Ц型电导检测器.校正方法采用外标法.以中国科学院生态环境中心标样组提供的标准硫酸根溶液标准溶液. 2.3　Sepharose C L24B柱层析 Sepharose C L24B(Phamarcia Fine Chemicals柱,生理盐水洗脱.J K H L22恒流泵,BS2100A自动部分收集器收集,洗脱速度为0.18m L/min,苯酚2硫酸法测分布. 2.4　醋酸纤维素薄膜电泳 采用浙江黄岩曙光化工厂生产的醋酸纤维素膜(2cm×8cm,0.025m ol?L-1硼砂2NaOH(pH=10缓冲液,按常规方法进行. 2.5　红外光谱法 美国Matts on公司生产的傅立叶变换红外光谱仪,型号为A LPRA2CE NT AVRI,K Br压片. 2.6　圆二色谱 采用J2500C圆二色谱仪(日本分光工业株式会社,DP2500N DAT