(教师版)第一轮复习第1讲 基因工程.pptVIP

反转录法 化学合成法。 DNA复制 PCR技术 基因克隆 场所 细胞核 生物体外 细胞内 酶 解旋酶、 DNA聚合酶 Taq酶 限制酶、连接酶 载体 不需要 不需要 需要 遵循原则 碱基互补配对 碱基互补配对 碱基互补配对 结果 DNA分子 DNA分子片段 DNA分子片段 DNA复制、PCR技术与基因克隆 2．基因表达载体的构建 (1)目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)组成： 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。 ①启动子： 一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别、结合的部位,驱动基因转录出mRNA。 ②终止子： 一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端，作用是使转录过程停止。 ③标记基因： 一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的基因是否导入成功)。 ④目的基因: 是插入的外源基因 (3)构建方法 (2) 导入方法 受体细 胞种类 方法 植物细胞 ①农杆菌转化法：目的基因插入Ti质粒的T－DNA→转入农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达　②基因枪法　③花粉管通道法 动物细胞 显微注射法：目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→新性状动物 微生物细胞 感受态细胞法： Ca2＋处理受体细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 3．将目的基因导入受体细胞 (1)目的：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内 维持稳定和表达的过程。 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 目的基因插入植物细胞中染色体的DNA上→进入农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达 目的基因表达载体提纯→取受精卵→显微注射→受精卵移植→ 新性状动物 首先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞壁的通透性增大，细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程 (3)受体生物与受体细胞类型的关系 ①植物：可以是受精卵、体细胞(经组织培养成为完整植株)。 ②动物：受精卵(体细胞的全能性受到限制，不能发育为完整个体)。 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 分 子 检 测 导入 检测 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 是否成功显示出杂交带 表达 检测 目的基因是否转录出mRNA 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 同上 目的基因是否翻译出蛋白质 蛋白质分子杂交(抗原和抗体之间) 同上 4．目的基因的检测与鉴定 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 个体生物学水平的鉴定 ①确定是否具有抗性及抗性程度 ②基因工程产品与天然产品的活性是否相同 ①抗虫或抗病的接种实验 ②基因工程产品与天然产品活性的比较 是否赋予了预期抗性或蛋白质活性 重要考点提示 1．基因表达载体的构建是基因工程最核心的步骤，该过程把三种工具(只有两种工具酶)全用上了，在体外进行。 2. 与载体相比较，增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段，其功能各不相同。②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。 6、(2010·浙江卷)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 (　　) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 　A [解析]　构建重组DNA分子时，需用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和栽体，再用DNA连接酶连接形成重组DNA分子，而烟草花叶病毒的遗传物质是RNA，所以A项错误。重组DNA分子形成后要导入受体细胞(若是植物细胞，则可导入其原生质体)，若导入的受体细胞是体细胞，经组织培养可获得转基因植物。目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力，可用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞。 [答案]　A 7、下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是(　　) A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端 B 【解析】基因表达载体是目的基因与载体的结合，在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体，用DNA连接酶将相同的末端连接起来；基因表达载体的构建是