《血红蛋白提取和分离》.pptxVIP

;血红蛋白的组成;一、基础知识;1.方法及原理;; 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 ;相对 分子质量;缓冲溶液;还记得人体血液中的缓冲液吗？; （三） 电泳：;二、实验操作－－实验步骤;2.提问：血液有哪些成分？;;1.洗涤红细胞;2.释放血红蛋白;;;纯化－－凝胶色谱操作;步骤;色谱柱内不能有气泡；装完后，立即用缓冲液洗涤，平衡凝胶使凝胶装填紧密。;（3）样品加入与洗脱;3.样品的加入和洗脱;思考下面的问题：; 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。;1. 红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。 2.色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 3. 凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。 4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。;血红蛋白的提取和分离;1.随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是（ ） A.弄清各种蛋白质的空间结构 B.弄清各种蛋白质的功能 C.弄清各种蛋白质的合成过程 D.获得高纯度的蛋白质;2.使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（ ） A.电荷的多少 B.分子的大小 C.肽链的多少 D.分子形状的差异;3.用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（ ） A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子 质量较大的蛋白质 B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子 质量较大的蛋白质 C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子 质量较大的蛋白质 D.二者根本无法比较;4.在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是（ ） A.调节pH B.维持红细胞的能量供应 C.防止微生物生长 D.防止血液凝固;6.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ） A.可采集猪血作为实验材料 B.用蒸馏水重复洗涤红细胞 C.血红蛋白释放后应低速短时间离心 D.洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液