气相色谱法快速定量检测丙烯腈的生物催化产物-.docVIP

气相色谱法快速定量检测丙烯腈的生物催化产物 王铁钢1,罗 晖 1,朱燕勤2,于慧敏*2,杨慧芬1,沈忠耀2 (1.北京科技大学环境工程系,北京100083;2.清华大学化学工程系,北京100084 摘 要:利用微生物催化丙烯腈生产丙烯酰胺在工业上已经得到了广泛的应用。 生产中反应液同时含有底物丙烯腈、产物丙烯酰胺以及副产物丙烯酸。为了控制产品质量,需快速定量检测反应液中各组分。采用毛细管柱PEG-20M(30m 0.25mm i.d.,2 m,以20g L的乙酰胺作为内标物对反应液进行气相色谱 分析,优化分析条件为:进样口为SPL,温度260;FID检测器,温度260; 柱温190;载气为氮气,流速25cm min;分流进样,进样量0.4 L,分流比为50!1。在4min内,3个组分得到完全分离,该方法具有良好的重现性和线性关系,回收率分别为98 5%、102 1%、105 0%,相对标准偏差分别为9 1%、 5 3%、1 7%。该方法分析速度快,适合实验室与工厂生产中大量快速定量检 测样品。 关键词:气相色谱法;快速定量检测;丙烯腈;丙烯酸;丙烯酰胺 中图分类号:O657.7 文献标识码:A 文章编号:1000 0720(200701 054 04 利用微生物产生的腈水合酶催化丙烯腈生产丙烯酰胺是成功应用微生物法来大规模生产大宗化学品的典范。在反应液中产物丙烯酰胺及副产物丙烯酸和底物丙烯腈共存,为测定酶促反应进行的程度及相应的酶活,需快速定量检测反应液中各种组分。对此反应体系,一般常用的检测方法是气相色谱法,孙旭东采用不锈钢填充柱(填料为Porapak Q进行分析,色谱峰较宽,分析时间需8min左右[1];尹志辉等[2]对丙烯酰胺中的微量杂质进行定量分析,分析时间比较长[3~5]。毛细管气相色谱法是近年来发展起来的一种分析手段,它具有较高的灵敏度和选择性,能够快速有效的确定多种物质的准确含量,且具有多种不同规格的毛细管柱可供选择[6]。为快速检测催化进程和酶活,本文经试验建立了一种简单快速的分析检测方法,采用毛细管柱PEG-20M,对反应体系中各组分的快速定量分析方法进行了研究。1 实验 1.1 仪器与试剂 气相色谱仪GC-2010(Shimadzu,配备自动进样器及工作站。丙烯腈、丙烯酰胺、丙烯酸及乙酰胺均为分析纯。 1.2 操作条件 色谱柱为PEG-20M毛细管柱(兰化所,柱长30m,内径0.25mm,液膜厚度2 m;进样口为SPL,温度为260;采用FID检测器,温度为260 ;柱箱温度为190;载气为氮气,线速度为25 cm min;采用分流进样,进样量0.4 L,分流比为50!1。 1.3 标准溶液配制 准确称取10g乙酰胺于500mL的容量瓶中,去离子水溶解并定容,得20g L的内标物标准溶液,备用;同理配制丙烯酰胺标准溶液;分别取一定量的丙烯腈、丙烯酸,配制不同浓度的标准溶液备用。 收稿日期:2006 04 17;修订日期:2006 07 10 基金项目:国家自然科学基金全国优秀博士论文作者专项(200345项目资助作者简介:王铁钢(1982-,男,硕士研究生 1.4 实际样品的预处理 取一定体积的菌液,5000r min下离心10 min,弃上清液,得到菌体,生理盐水重悬菌体,同条件下离心取菌体,再次重悬于pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,加入一定量的底物丙烯腈,28条件下振荡反应20min,准确加入0 5mL6 mol L HCl终止反应,相同条件下离心,取上清液,与等体积乙酰胺溶液混匀,备用。 2 结果与讨论 2.1 条件实验 2.1.1 色谱柱的选择 选择不锈钢填充柱(填料为Porapak Q,北分厂、毛细管柱SE-30(北分厂以及PEG-20M(兰化所分别对样品进行了分析。结果表明:在分离度满足条件下,不锈钢填充柱分离度较大,但分析时间较长且色谱峰较宽,不适进行大量快速的检测;毛细管柱SE-30的分离度较小,丙烯酸和乙酰胺色谱峰拖尾严重,其原因可能是该色谱柱为弱极性柱而样品为极性样品;毛细管柱PEG-20M出峰保留时间短,色谱峰较窄且分离度大,适合用于大量分析。因此,选用毛细管柱PEG-20M。该柱参数为:柱长30m,内径0.25mm,液膜厚度2 m。 2.1.2 分析条件的确定 考察了进样口温度、柱温、检测器温度、载气线速度、分流比、进样量对分析效果的影响。柱温越高,峰间距越小,分离度越小,主要表现为丙烯酸和内标物乙酰胺分离度小,原因主要是因为丙烯酸会拖尾,这是由于其自身色谱性质决定;载气速度越大,出峰保留时间越小;分流比和进样量与峰面积大小呈正比关系。经试验,在保证出峰保留时间较小且峰之间有较好的分离度的条件下,确定了毛细管柱PEG -20M的最佳色谱分析条件是:进样口温度260