实验动物基本实际操作.ppt

* 等待它们的是存亡未卜的将来！ * 门齿和爪随年龄增长而增长。 * * 1、复配检查法把交配一周左右的母兔放?到公兔笼中，如果母兔不亲近或逃避公兔，并发出“咕咕”的叫声，臀部下卧，尾巴不举等则表示已妊娠;如果母兔表现亲近公兔，并频频?举尾，愿意接受交配时，一般没有妊娠。 ?2、称重检查法母兔在配种前要称好体重，?配种后10- 15天再称一次，如果体重显著增?加，说明已经妊娠;如果体重没有增加，就是?没有妊娠。 ?3、摸胎检查法配种后10天左右，可对母?兔进行检查，检查时一只手先抓住兔耳及后?颈皮肤，使兔头朝向检查者，另一只手放在母?兔腹下，自前向后，沿腹部来回轻轻仔细摸寻?腹腔子宫。如果摸到一个接一个如串珠似的?或像花生米大小的肉球，感觉柔软，在指间滑?来滑去，这就是胎儿。可确认母兔已妊娠。初?摸者要注意将胎儿与粪球区分开，胎儿柔软?而且有弹性;粪球粗糙质硬，没有滑动感，无?弹性。 摸胎检查较为准确可靠，但检查时要小心，严防粗暴按压或拍打母兔，以防造成流产。? 4、妊娠以后，胎盘具有分泌绒毛膜促性腺激素(HCG)的功能，激素分泌后即进入血液，由尿排出。生物试验常用的是将孕妇的尿注入雄青蛙的背部皮下，由于孕妇的尿中有HCG，因而刺激雄蛙排出精子——注入后4小时，从蛙的泄殖腔取出排泄物，于显微镜下得见精子。故而有精于为妊娠试验阳性(十)，表明受孕；无精子为阴性(—)。 猴怀孕也可用早孕试纸来快速检测。 * 动情前期：阴道分泌物中大部分是膨大椭圆形扁平上皮细胞。此期 约持续17－21小时，当日下午出现排卵前促性腺激素高峰，从傍晚到深夜，此期结束。 动情期：膨大的上皮细胞核消失，成为鳞状脱落（角化上皮细胞）并聚 集在一起形成堆状，镜下好象许多落叶堆叠在一起。在情前期 过渡到发情时（即深夜）发生排卵，此时大鼠的发情行为达高 峰，此期约持续9－15小时。 动情间期：阴道分泌物中大部分是白细胞，混有少量角化上皮细胞，此期 约持续10－14小时。 动情后期：阴道分泌物中大部分是白细胞，偶尔可见较小的有核扁平上皮 细胞。此期约持续60－70小时。 * 将动物所需脱毛的部位用剪刀尽量剪短，用棉球沾着脱毛剂在脱毛部位涂成薄层，经2~3分钟后,用温水洗去脱毛部位脱下的毛,用纱布将水擦干,涂上一层油脂。 上述1~3种配方对家兔,大小白鼠等动物脱毛效果很好；而第7种配方对狗的脱毛效果很好。 * 二甲苯涂擦后血管扩张 * 操作方法1．采血法 各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。2．抗凝 采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下：（1）肝素抗凝：采血时，使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量，按1 000U/ml的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。（2）EDTA抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将EDTA配制成4％溶液，然后按预采血液的量，以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血，并不断摇动采血容器，使之混匀。（3）玻璃珠法：预先将适量的玻璃珠（根据采血量多少而定）清洗后，装入采血容器中，灭菌后备用。采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。本法虽较麻烦，但对淋巴细胞的活性影响最小，且可减少血小板的混杂。（4）阿氏液采血：以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液，边采边轻轻摇动采血瓶，使之混匀。用阿氏液采血，除了抗凝外，多用于红细胞的保存。一般在4℃条件下，阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。 * 小鼠唾液的收集：0.01%毛果芸香碱溶液腹腔注射，300ul，3分钟后取口腔流出的唾液于0.5mlEP管中-20℃中保存。 大鼠：0.2%毛果芸香碱2mg/kg颈部皮下注射， 3分钟后取口腔流出的唾液。 * 小鼠、大鼠（或豚鼠） 灌胃时将灌胃针按在注射器上，吸入药液。左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食道。动物应固定成垂直体位，针插入时应无阻力。若感到阻力或动物挣扎时，应立即停止进针或将针拔出，以兔损伤或穿破食道以及误入气管。 　　一般当灌胃针插入小鼠3～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm后可将药物注入。常用的灌胃量小鼠为0.2～ 1ml，大鼠1～4ml，豚鼠为1～5ml。 狗、兔、猫、猴? 灌胃时，先将