第十一章细菌.pptVIP

细菌计数 使用 Petroff Hausser 计数计 活菌平板计数 使用 Petroff Hausser 计数计 用1ml或2ml的移液管无菌移取0.5ml的菌液至微量离心管中，如果菌液量较少，就减少移取的体积。 取出计数计，用水和70%的乙醇将其清洗干净，用吸水纸吸干，将盖玻片放上，保证计数室处在盖玻片的中央。 将50μl菌液加入计数室。取样前将菌体摇匀，吸出50μl ，不要直接打下。缓慢按下移液器的按钮，使液体滴出，但不要滴下，让这一滴液体留在嘴尖，把这一滴液体接触盖玻片。 的一边，由于毛细现象液体会被吸入。注意不要使液体溢出计数室，如果液体溢出到沟槽内，那么把板吸干重新来过。 静置5 min。 把计数板放在载物台上，用10×物镜找到计数室后，换到40 ×物镜。 大体数一下以决定是否需要稀释，在25个小方块内应有100-500个菌体。如果太多，计数会不准确。稀释5或10倍后，半数时会省下很多时间。 计数。最少要计数25个方格内的菌体数（包括压线的），将数出的总数除以方格数，重复3次取平均值。 计算。将平均每格内的细胞数乘以2×107，如果进行稀释了，再乘上稀释倍数，得到的是原始菌液的细胞数/ml。 * * 第十一章 细菌的分类 试验台操作 操作规则 获得细菌的途径 细菌培养和维护 获得分离的克隆 细菌计数 贮藏 污染 一 细菌的分类 1级 （不致病 ）大肠杆菌 枯草杆菌 2级（ 低致病） 沙门氏菌 志贺氏菌 BL1BL2级操作 3级 （高治病） 结核分支杆菌 牛分支杆菌 BL3级操作 4级 （对个体和社会造成巨大危害） 部分节肢动物传染病毒、沙粒病毒和线状病毒 BL4级操作 细菌的分类 试验台操作 操作规则 获得细菌的途径 细菌培养和维护 获得分离的克隆 细菌计数 贮藏 污染 二 试验台操作 筛选突变体 培养有机体 测定细菌的浓度 离心培养物 转化 抽提质粒 培养使用过的废物分：锋利的、液体废物、固体废物、放射性废物等 细菌的分类 试验台操作 操作规则 获得细菌的途径 细菌培养和维护 获得分离的克隆 细菌计数 贮藏 污染 三 操作规则 遵守最通常的实验室安全守则 每天最少清洗一次试验台 丢弃可能传染疾病的废物前要清除污染 接触可传染的物质后，在离开实验室前都要洗手 实验中尽量避免产生气溶胶 不要积累培养皿和试管 废物处理 液体废物：加入次氯酸钠至终浓度10%，放置30分钟后再倒入下水道，大量水冲洗。 固体废物：当作有生物危害的物品处理，高温高压灭菌后丢弃，这是一个实验室或是系的责任而且必须注明。 细菌的分类 试验台操作 操作规则 获得细菌的途径 细菌培养和维护 获得分离的克隆 细菌计数 贮藏 污染 四 获得细菌的途径 实验室成员 其他研究人员 美国模式培养物保藏所（ATCC） 其他的收集和服务组织(疾病控制和防治中心等) 每得到新菌株都要确认它的确是你所需要的那种，不要根据包装或价格来认定 培养细菌的价值 细菌的分类 试验台操作 操作规则 获得细菌的途径 细菌培养和维护 获得分离的克隆 细菌计数 贮藏 污染 五 细菌培养和维护 摇瓶培养和固定培养 液体培养、半固体培养和固体培养 2 细菌培养的方法 1 了解所培养微生物的生理知识 大肠杆菌在液体培养基中的正常生长曲线 滞后期 稳定期 对数期 死亡期 3 培养基的分类 按用途分类 基础培养基 完全培养基 鉴别培养基 选择培养基 厌氧培养基 按物理性状分类 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂。用于观察细菌动力、保存菌种。 固体培养基：平板、斜面。含2％～2.5％琼脂。平板：用于细菌的分离培养。斜面：用于纯培养、保存菌种。 4培养基制备的一般程序 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 检定 保存 4 培养基制备的一般程序 调配：按照培养基配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸馏水量。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调至培养基规定的pH值，用pH试纸对照。 分装加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 灭菌：不同培养基采取不同灭菌方法。 检定：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 保存：一般至4℃保存备用。 复苏培养 复苏冻干菌 复苏冻存菌株 复苏复杂营养细菌培养物 复苏冻干菌的步骤 用70%的乙醇清洁管子的外部 加入0.4ml的无菌培养基（预热的）至试管中 用吸管小心吹打，直