型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定.pdfVIP

中国兽药杂志２０１９年１１月第５３卷第１１期　 　 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇ ·１· ｄｏｉ：１０．１１７５１／ ＩＳＳＮ．１００２－１２８０．２０１９．１１．０１ 猪圆环病毒２型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定 １ １，２ ∗ １ ２ ２ ３ １ １，２ ∗ 王长江 ，曲光刚 ，武曰星 ，管 宇 ，魏 凤 ，侯运专 ，赵中伟 ，沈志强 （１．山东绿都生物科技有限公司，山东滨州２５６６００；２．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州２５６６００；３．华中农业大学，武汉４３０００） ［收稿日期］２０１９－０７ －３１　 ［文献标识码］Ａ　 ［文章编号］１００２－１２８０（２０１９）１１－０００１－０８　 ［中图分类号］Ｓ８５２．６５ ［摘　 要］　 为构建猪圆环病毒２ 型（ＰＣＶ２）特异性纳米抗体文库，并对其库容和多样性进行鉴定分 析，使用ＰＣＶ２ 全病毒灭活疫苗免疫羊驼，经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞，提取总ＲＮＡ，通 过ＲＴ－ＰＣＲ反转录合成ｃＤＮＡ；根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物，通过巢式ＰＣＲ扩增羊 驼单域重链抗体（ｖａｒｉａｂｌｅｄｏｍａｉｎｏｆｈｅａｖｙｃｈａｉｎｏｆｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ，ＶＨＨ）基因片段ｖｈｈ，并将其 克隆到噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ 中，构建ｐＣＡＮＴＡＢ－ ｖｈｈ 重组质粒；通过电穿孔法将重组质粒导入 Ｅ． ｃｏｌｉＴＧ１获得抗ＰＣＶ２特异性纳米抗体基因文库。 文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数，并通过 菌液ＰＣＲ鉴定重组菌阳性率，计算抗体文库库容量；对ＰＣＲ鉴定为阳性的重组质粒进行测序，分析 抗体文库多样性。 结果显示，构建的ＰＣＶ２特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为９２．０％，库容量为 １０ ２．７５×１０ ＣＦＵ／ ｍＬ；测序后序列比对分析结果表明，纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样 性。 本研究成功构建了ＰＣＶ２特异性纳米抗体文库，且文库质量满足后续试验要求，为进一步获得 针对ＰＣＶ２抗原的纳米抗体奠定了基础。 ［关键词］　 猪圆环病毒２ 型；羊驼；纳米抗体文库；抗体库容量；多样性 Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｎａｎｏｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｙ ａｇａｉｎｓｔ ＰＣＶ２ １ １，２∗ １ ２ ＷＡＮＧ Ｃｈａｎｇ－ｊｉａｎｇ ，ＱＵ Ｇｕａｎｇ－ｇａｎｇ ，ＷＵ Ｙｕｅ－ｘｉｎｇ ，ＧＵＡＮ Ｙｕ ， ２ ３ １ １，２ ∗ ＷＥＩ Ｆｅｎｇ ，ＨＯＵ Ｙｕｎ－ｚｈｕａｎ ，ＺＨＡＯＺｈｏｎｇ－ｗｅｉ ，ＳＨＥＮ Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ （１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ ＬｖＤｕＢｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ． ，ＬＴＤ，Ｂｉｎｚｈｏｕ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２５６６００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｓｈａｎｄｏｎｇ ＢｉｎｚｈｏｕＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ＭｅｄｉｃｉｎｅＡｃａｄｅｍｙ，Ｂｉｎｚｈｏｕ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２５６６００，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００００，Ｃｈｉｎａ） 　 　 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＳＨＥＮ Ｚｈｉ－ｑｉａｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｚｓｈｅｎｚｑ＠１６３．ｃｏｍ；ＱＵＧｕａｎｇ －ｇａｎｇ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕａｎｇｇａｎｇｑｕ＠１６３．ｃｏｍ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｎａｎｏｂｏｄｙ ｌｉｂｒａｒｙ ａｇａｉｎｓｔ ＰＣＶ２ ａｎｄ ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｉｔｓ ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔ