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紫杉醇对人树突状细胞生物活性影响 ［摘要］目的探讨常用化疗药物紫杉醇（TAX）对 人树突状细胞（DC）生物活性的影响及作用机制，为化疗联 合生物免疫治疗抗肿瘤提供理论基础。方法体外实验：分 别在紫杉醇 5 ng/mL （b 组）、10 ng/mL （c 组）、20 ng/mL （d组）、40 ng/mL （e组）的浓度下及不加紫杉醇的条件下 （a组）培养DC细胞，检测各组DC细胞的存活率、细胞成 熟标志物及细胞因子分泌量，探究紫杉醇对人树突状细胞生 物活性的影响，同时通过乳酸脱氢酶释放法（LDH）测定与 紫杉醇处理的树突细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞 （CIK）对肺癌A549细胞株的杀伤作用，测定紫杉醇对树突 细胞抗原呈递作用的影响。体内实验：采用人肺癌细胞株 A549的肿瘤组织块，皮下接种于裸鼠腋下，建立裸鼠肺癌模 型。2 d后将30只裸鼠随机分成5组，分别为A组（对照组）: 细胞株A549+盐水（NS）； B组:细胞株A549+DC+CIK； C组: 细胞株A549+CIK+TAX； D组：细胞株A549+TAX； E组：细胞 株A549+TAX+DC+CIK。每3天检测1次肿瘤大小、裸鼠存活 时间。结果 体外实验：在共培养6 d的前提下，b、c组第 6天存活率与第0天存活率比较，差异无统计学意义（P 0.05）, d、e组第6天存活率与第0天存活率比较，差异有 高度统计学意义（P 0. 05） between the cell survival rates in group b and group c on the day 6 and that on day 0 after co~cuItured 6 days? There was significant statistical difference ( P [Key words] Paclitaxel ； Human dendritic cells ； Biological activity； Lung cancer 恶性肿瘤在我国居民疾病致死原因中位列第三，其中肺 癌的致死率逐年上升。最近的研究数据显示，肺癌已经超过 胃癌，成为所有癌症中每年致死人数最多的肿瘤[1]。目前 肿瘤主要的治疗方法为外科手术切除，化疗、放疗。但肿瘤 患者经过手术、常规化疗、放疗达到临床治愈后，体内仍残 留肿瘤细胞，停止治疗后，残留的肿瘤细胞又开始增殖，经 若干时间后会达到109个细胞，出现临床复发，这是治疗失 败的主要原因之一。生物免疫治疗作为新的治疗方法最近得 到了广泛的关注，其具有靶向杀伤、特异性高、不良反应小 以及可以杀伤对化疗耐药的肿瘤细胞等优势[2-3] o目前在 国内、外得到广泛应用的免疫细胞治疗是树突状细胞 (dendrite cell, DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells, CIK)两种细胞联合治疗肿瘤，但 传统治疗理念认为化疗药物可以杀死免疫细胞，所以生物免 疫治疗经常在化疗间歇期进行，笔者查阅了一些国外的文 献，认为只要掌握好化疗药物的剂量，在化疗期间也可应用 免疫细胞治疗，本实验通过体外和体内两种途径，探究化疗 药物紫杉醇对免疫细胞DC、CIK生物活性的影响和对抑制肿 瘤能力的调控，为化疗期间同时应用免疫细胞治疗提供基础 理论依据。 1材料与方法 1.1材料 1. 1. 1肿瘤细胞株肺癌A549细胞株来源于中国医科大 学肿瘤研究所，由辽宁省人民医院生物治疗中心实验室体外 传代培养。 1.1.2药品及试剂 基因重组人IL-2 （北京双鹭药业股 份有限公司）、抗-CD3单抗（CD3McAb）、淋巴细胞分离液 （Ficoll Paque Plus 公司）、Triton X-100 （德国 Applichem 公司）、基因重组人IFN-Y （上海凯茂生物医药有限公司）、 白细胞介素T （IL-1）、RPMI Medium 1640培养基（美国 GIBC0）、胎牛血清（美国GIBCO）、PBS缓冲液、紫杉醇注射 液、酶联免疫检测仪、全自动血细胞分析仪、24及96孔板、 复方枸椽酸钠保存液、流式细胞检测抗体anti-CD86-FITC、 anti-CD40-PE、anti-MHCII-PE、anti-ILT2-PE 均来自 BD 公司。LDH ELISA试剂盒。 1. 1. 3实验动物30只SPF级BALB/C裸鼠，购于北京华 阜康科技股份有限公司，（许可证号:SCXK （京）2009-004）, 由沈阳中海生物技术开发有限公司动物中心饲养，雌性，鼠 龄6?8周，体重18?22 go 1. 2方法 1.2. 1冻融法制备肺癌A549细胞抗原消化收集对数生 长期的A549细胞，用PBS液离心洗涤两次，再用PBS液重 悬