RNAi沉默CXCR7对人结肠癌细胞SW620特异性靶向抑制的.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（２）：１４２０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ ＲＮＡｉ沉默ＣＸＣＲ７对人结肠癌细胞 ＳＷ６２０ 特异性靶向抑制的实验研究 王　鑫　陈　玲　孙　飞　陆　航 （辽宁医学院附属第一医院　锦州　１２１０００） 摘要　目的：探讨慢病毒介导的ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ转染人结肠癌细胞株ＳＷ６２０后对ＣＸＣＲ７蛋白表 ＴＭ 达的影响。方法：（１）设计并合成ＣＸＣＲ７的３对ｓｈＲＮＡ序列及 １对阴性对照序列，与ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ ４．１系统合成构建重组慢病毒载体，转染ＨＥＫ２９３Ｔ细胞包装病毒并检测滴度；（２）将３种重组慢 病毒载体及阴性对照分别感染人结肠癌细胞ＳＷ６２０，ＲＴＰＣＲ检测ＣＸＣＲ７ｍＲＮＡ的表达情况，测 定沉默效率，筛选沉默效率最高的一组ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ作为后续实验表达载体；（３）ＭＴＴ法检测转 染ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ对 ＳＷ６２０细胞生长增殖的影响；（４）通过细胞划痕实验检测转染 ＣＸＣＲ７ ｓｈＲＮＡ对ＳＷ６２０细胞侵袭迁移能力的影响；（５）Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转染ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ对ＳＷ６２０ 细胞蛋白表达情况。结果：（１）测序证实３对慢病毒载体及 １对阴性对照载体均包装成功，滴度 ８ ８ ８ ８ 分别为３．１６×１０ＴＵ／ｍｌ、４．２７×１０ＴＵ／ｍｌ、３．９３×１０ＴＵ／ｍｌ和２．９５×１０ＴＵ／ｍｌ；（２）３组慢病毒 载体转染ＳＷ６２０细胞后，ＣＸＣＲ７ｍＲＮＡ的表达量均较阴性对照组明显降低（Ｐ＜０．０５），其中 ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ１对ＣＸＣＲ７的抑制率明显高于其他两组（Ｐ＜０．０５）；（３）ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ１转染 ＳＷ６２０后，肿瘤细胞的增殖程度显著减少，与空白组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；（４）ＳＷ６２０细 胞在划痕２４ｈ后，空白对照组和实验组的细胞迁移指数（ＭＩ）分别为（４９．９２±６．４１）％和（２９．１３± ５．３８）％，有统计学意义（Ｐ＜０．０５），划痕４８ｈ后，对照组与实验组的ＭＩ分别为（９６．５２±７．４４）％ 和（７２．０３±８．２９）％，有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；（５）ＣＸＣＲ７ｓｈＲＮＡ１转染ＳＷ６２０细胞后，与空病 毒载体组、空白组相比，ＣＸＣＲ７蛋白表达量明显降低，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：ＣＸＣＲ７ ｓｈＲＮＡ慢病毒表达载体转染ＳＷ６２０细胞后可有效下调ＣＸＣＲ７ｍＲＮＡ和蛋白的表达水平并能够 抑制肿瘤细胞的增殖与迁移，为下一步研究以ＣＸＣＲ７／ＣＸＣＬ１２生物学轴为靶点的结直肠癌慢病 毒基因沉默治疗打下了良好的基础，为结直肠癌的基因治疗提供了新方向。 关键词　结直肠癌　ＣＸＣＲ７　ＣＸＣＬ１２　重组慢病毒载体　ＲＮＡｉ 中图分类号　Ｑ８１９ 　　结直肠癌是目前我国最常见的恶性肿瘤之一，死 　　结直肠癌的发生发展过程涉及基因及蛋白质层面 ［１］ 众多肿瘤相关因子的异常表达及功能改变，对这些异 亡率高于世界平均水平 。早期就发生的侵袭转移是 影响结直肠癌患者预后及生存的主要因素，这也是影 质性的分子事件进行深入研究是发现新的肿瘤治疗手 响其他肿瘤患者生存和预后的关键性因素。虽然近年 段及治疗靶点的重要方法。随着基因治疗的发展，靶 来诊断技术和医疗技术在不断提高，但其治疗效果和 向治疗成为了抗肿瘤特异性治疗的最高层次，从分子 ［２３］ 水平来阻断侵袭转移的基础和环境是目前结直肠癌治 临床预后仍然不是十分理想 。