UCE对多种球虫感染的免疫保护效果评估.pdfVIP

－ 　 南京农业大学学报　 ２０１８ꎬ４１(３):４９６ ５０３ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＤＯＩ:１０.７６８５/ ｊｎａｕ.２０１８０１００８ 刘剑华ꎬ刘连瑞ꎬ李灵娟ꎬ等. 鸡球虫共同抗原ＵＣＥ免疫原性分析及其对多种球虫感染的免疫保护效果评估[Ｊ]. 南京农业大学学报ꎬ２０１８ꎬ － ４１(３):４９６ ５０３. 鸡球虫共同抗原ＵＣＥ免疫原性分析及其 对多种球虫感染的免疫保护效果评估 １ １ ２ １ １ １ １∗ 刘剑华 ꎬ刘连瑞 ꎬ李灵娟 ꎬ徐立新 ꎬ严若峰 ꎬ李祥瑞 ꎬ宋小凯 (１.南京农业大学动物健康与食品安全国际实验室ꎬ江苏 南京 ２１００９５ꎻ２.河南牧翔动物药业有限公司ꎬ河南 郑州４５１１６２) 摘要:[目的]在前期研究中ꎬ筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(ＵＣＥ)ꎬ本研究进一步分析 其免疫原性ꎬ评估其对多种球虫感染的免疫保护效果ꎮ [方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总ＲＮＡꎬ用反转录 ＰＣＲ(ＲＴ￣ＰＣＲ)技术扩增堆型艾美耳球虫 ＵＣＥ 基因(ＥａＵＣＥ)ꎬ插入ｐＶＡＸ１质粒ꎬ构建真核表达质粒ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥꎬ通过 ＲＴ￣ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥ在鸡体内的转录和表达情况ꎮ 经流式细胞术和间接ＥＬＩＳＡ法检测ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥ 免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化ꎬ分析其免疫原性ꎮ 分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球 虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡ꎬ观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量ꎬ评估其对多种球虫感染的免疫保 护效果ꎮ [结果]ＥａＵＣＥ基因开放阅读框为４４４ ｂｐꎬ编码 １４８个氨基酸ꎬＢＬＡＳＴ分析显示ꎬ柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球 虫、巨型艾美耳球虫ＵＣＥ氨基酸序列同源性均大于９５％ꎮ ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥ 能够在鸡体内成功转录和表达ꎮ ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥ免 ＋ ＋ ＋ ＋ 疫后ꎬ鸡体的ＣＤ / ＣＤ 和ＣＤ / ＣＤ 细胞比例显著升高ꎬＩＦＮ￣γ、ＩＬ￣２、ＩＬ￣４、ＴＮＦＳＦ１５、ＩＬ￣１７Ｄ、ＴＧＦ￣β４ ｍＲＮＡ和ＩｇＹ抗体水平 ４ ３ ８ ３ 显著升高ꎬ表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(Ｐ０.０５)ꎮ ｐＶＡＸ￣ＥａＵＣＥ免疫后ꎬ与对照组相比ꎬ免疫组鸡体 质量显著增加ꎬ卵囊产量明显下降ꎬ肠道损伤也相应减轻ꎮ [结论]鸡球虫共同抗原ＵＣＥ具有良好的免疫原性ꎬ可对多种球 虫感染提供部分免疫保护力ꎬ有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原ꎮ 关键词:鸡球虫ꎻ共同抗原ꎻ泛素缀合酶结构域蛋白(ＵＣＥ)ꎻ免疫原性ꎻ混合感染 － － － 中图分类号:Ｓ８５５.９　 　 　 　 文献标志码:Ａ　 　 　 　 文章编号:１０００ ２０３０(２０１８)０３ ０４９６ ０８ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｏｍｍｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ＵＣＥ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｅｉｍ