蛋白质提纯干实验.docxVIP

一、实验目的： 1. 了解細法和意义掌?M protein软白质“如。2.姑步熟觀航蚁性、W? 常用生化分离宓的丿剌里和酬。二災羯枫： “Prolein”软件旳36个任务 呗6组待分离纯化的蛋白。任务耍求^用软件提供的丿州映验技术，啟每?个II的蛋白， 最终达到单?向电泳一条带，双向电泳 个自 而且使JIJ的人时和经费（根据提取步骤计算得到）不得超过 饰定值。在毎 个任务开始时，软件给出目的蛋口的一些性质，如热稳定的温度范围和pll稳定范围等，利用这些（言息，可以使实验少走弯 路。 “Protein”提供的分离纯化方法冇七种：（诧陵性；创緻沉淀；③ffliy析（鞠迢谱）；④离子交换站斤；⑤吸附层析; 酥輙析；?W备电泳。 在“Protein所提供的各种分离纯化方法中，做蔗阳去和盐析法是比较好的粗提方法，右捉纯的早期使JIJ效果较好。层析 是各种方法中最强冇力的方法 制胳电泳如然纯化倍数高，但是冋收率低。在各种层析方法屮，又以离了-交换层析最呦j 效和易于使用，并H耗费的人II寸和经费也较少。排层层析和聚焦层析耗费较人，但缺自寺定情况下，这两种力法是不町 絹曲勺。 “Prolein”提供了四种li泳方法 即，SDS PAGE. PAGE.等也轻焦电泳和双向电泳。这些电泳方法不但可师以检测样品 的细叟，而.H.也给出了样品的-?些信息，如分伍、等电点等，这些信息对丁?后续够悄取要的参考价值，等电聚焦电泳 利〉AGE还叮以用于制备。 本郦要求秋实验软件11 -三和解的分离纯化。 三实验步骤 1.选圧耍提纯的蛋门质 新任务 迭择任务口 36） 任务信息: 38,5.2-9.9 ▲ 2 ?热变性法 热变性法 水浴温度憧） 水浴MS（min）38 60Cancel 水浴温度憧） 水浴MS（min） 38 60 Cancel Step Procedure Protein(g) Enzyme (ui Enzyme yif ▲ Enrichmer Initial | 51.43 32557 100% 1 晏变性法 47 583 32231.43 99% 1 I1 3吸附层析发 a吸附层产法 「柱羞数 填料旧 柱长(cm)柱内径(cm) |Bio Gel HTP [35 [ZO 绫冲体系(BH5.8?8 2J I确酿二氢评N^OH Z] pH 浓Jg (M) 3S8(ml/min) |开始洗覲|取消?essJ；8 [ [ol |开始洗覲|取消 ?essJ File Ch ro m atog ra phy Electrophoresis Others Windows Help Step Procedure Protein(g) Enzyme (ui Enzyme yi( Enrichment Moneys) Time(h) Initial 51.43 32557 100% 1 0 0 1 热变性法 47.583 32231.43 99% 1.07 20 5 2 吸Pfl层析法 .05 38.1272 .11% 1.191 240 10 CancelEool Ilest IFrom|255 Cancel Eool I lest I From |255 4 ?凝胶色谱法 a凝胶色谱 L却」  Cancel Fool I gt I From fl65 To [170 File Chromatography Electrophoresis Others Windows 旦 elp Step Procedure Protein(g) Enzyme (ui Enzyme yi( Enrichment Moneys) Time(h) Initial 51.43 32557 100% 1 0 0 1 热变性法 47.583 32231.43 99% 1.07 20 5 2 吸Pft层析法 .05 38.1272 .11% 1.191 240 10 3 凝胶色诸 .001 14.2512 04% 20.808 686.8054 10 5.ISO-ELEC 法 样品PH梯度 3 4.4 5.8 7.2 8.6 6.SDS法 a电泳谱多 样品 标准 OK 92500 66500 44500 30600 21500 四.结果 27号蛋白质的PI为4.6左右，分子量为66000左右。